細菌內(nèi)毒素檢查法中凝膠法在藥品中造成異常結(jié)果的原因和解決方法

凝膠法實驗過程時間短，消耗樣品量少，且具有使用設(shè)備簡單，費用低等優(yōu)點，作為《中國藥典》“仲裁”檢查方法，廣泛用于注射劑藥品細菌內(nèi)毒素檢查。
 

1.干擾試驗的必要性
鱟試劑凝集反應(yīng)是一種二價陽離子酶反應(yīng)體系，有許多干擾反應(yīng)的物質(zhì)會干擾凝膠的形成。在新樣品測定中，必須首先進行細菌內(nèi)毒素干擾試驗，確定是否存在干擾樣品出現(xiàn)縮合反應(yīng)的因素。為了保證所選處理方案能夠在不滅活內(nèi)毒素情況下有效消除干擾，采用預先添加的標準內(nèi)毒素再處理液進行干擾試驗。

2.可能會出現(xiàn)的異常結(jié)果及其原因和解決方法

2.1造成呈假陰性的可能原因及解決方法
原因可能是：①內(nèi)毒素工作標準中存在的一些問題，如滴度標注不準確，過期或貯存不當導致失效，稀釋誤差或稀釋振蕩不夠，對照管沒有達到2λ陽性內(nèi)毒素濃度；②問題出在鱟試劑。例如，過期失效，振蕩不當，靈敏度標注不準確，會產(chǎn)生氣泡，鱟試劑酶蛋白變性，鱟試劑破壞；③溫控器溫度不符合要求或保溫時間不夠。

解決辦法包括：規(guī)范內(nèi)毒素標準效價的審查和鱟試劑在保質(zhì)期正確儲存和使用的敏感性；內(nèi)毒素稀釋應(yīng)準確，確保PC管添加2λ內(nèi)毒素；當使用可溶解的鱟試劑時，沿著管壁慢慢加水，讓混合器振蕩30s。避免劇烈振動產(chǎn)生氣泡，確保恒溫器溫度和保溫時間正確。

2.2造成假陽性的可能原因及解決方法
原因可能包括：實驗設(shè)備受到污染，經(jīng)熱原、外源性內(nèi)毒素或微生物污染不能完全滅活；試驗中由于誤操作造成的內(nèi)毒素污染；BET水不符合要求，內(nèi)毒素超標，培養(yǎng)溫度不正確等。解決方案包括：按照2015年版《中國藥典》的規(guī)定對實驗儀器進行處理；選擇合格的BET水，確保正確的培養(yǎng)溫度、時間和操作。

總而言之，細菌內(nèi)毒素檢查法已被列入許多國家藥典。方法學研究表明，用細菌內(nèi)毒素法取代家兔熱原法的藥物種類較多，因為它比家兔熱原法更精準、快速、簡捷、經(jīng)濟、容易推廣等諸多優(yōu)點。