多重PCR技術(shù)要點(diǎn)解析

多重PCR概述

多重PCR(multiplex PCR)，又稱(chēng)多重引物PCR或復(fù)合PCR，它是在同一PCR反應(yīng)體系里加上二對(duì)以上引物，同時(shí)擴(kuò)增出多個(gè)核酸片段的PCR反應(yīng)，其基本原理與常規(guī)PCR相同，區(qū)別在于多重PCR反應(yīng)體系加入一對(duì)以上引物，各對(duì)引物分別結(jié)合在模板相對(duì)應(yīng)部位，最終擴(kuò)增出一條以上目的DNA片段。

多重PCR的特點(diǎn)

•高效性：在同一PCR反應(yīng)管內(nèi)同時(shí)檢出多種基因，或?qū)τ卸鄠�(gè)型別的目的基因進(jìn)行分型，特別是微量樣本的多基因檢測(cè)。

•系統(tǒng)性：多重PCR適宜于成組病原體的檢測(cè)，如肝炎病毒，腸道致病性細(xì)菌，性病，無(wú)芽胞厭氧菌，戰(zhàn)傷感染細(xì)菌及細(xì)菌戰(zhàn)劑的同時(shí)偵檢。

•經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便性：多種病原體在同一反應(yīng)管內(nèi)同時(shí)檢出，將大大的節(jié)省時(shí)間，節(jié)省試劑，節(jié)約經(jīng)費(fèi)開(kāi)支。

多重PCR應(yīng)用

•基因診斷、腫瘤診斷、病原微生物的檢測(cè)。

•基因分型、連鎖分析。

•植物分子育種、基因表達(dá)檢測(cè)、病蟲(chóng)害檢測(cè)。

•病原菌污染檢測(cè)。

•區(qū)域捕獲測(cè)序。

多重PCR之難

多重PCR并不是單純的將多對(duì)特異性引物混合成一個(gè)體系。多重PCR之所以難，在于多個(gè)靶點(diǎn)之間擴(kuò)增條件不兼容，每個(gè)靶點(diǎn)都需要旁邊其他的引物配合。

就像是三人兩足游戲一樣，每個(gè)靶點(diǎn)成功擴(kuò)增都是需要綁在一起的兩個(gè)人（一對(duì)引物）默契配合。而多重PCR就需要所有的選手同時(shí)起跑又同時(shí)到達(dá)，并且所有的選手都達(dá)到最優(yōu)發(fā)揮。

多重PCR優(yōu)化

為了達(dá)到更好的擴(kuò)增效果，一般可以通過(guò)以下幾個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)化。

◆引物的優(yōu)化：

◆反應(yīng)體系：

◆反應(yīng)條件：

◆常見(jiàn)問(wèn)題解決辦法：

多重PCR要求在同一反應(yīng)體系內(nèi)對(duì)多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行特異性擴(kuò)增。因而引物間的配對(duì)與競(jìng)爭(zhēng)性擴(kuò)增均會(huì)影響擴(kuò)增效果。如果能選擇合適的反應(yīng)體系、反應(yīng)條件以及更合適的PCR儀，則有望提高多重PCR的擴(kuò)增效果。所以在進(jìn)行多重PCR的時(shí)候，不應(yīng)墨守成規(guī)，要根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)情況對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行不斷優(yōu)化，達(dá)到最佳擴(kuò)增效果。