RAW 264.7細(xì)胞培養(yǎng)攻略及常見(jiàn)問(wèn)題解決方案
瀏覽次數(shù):1965 發(fā)布日期:2023-1-10
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RAW 264.7細(xì)胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤;在正常培養(yǎng)中,細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)多邊形和不規(guī)則形狀,并伴有許多偽足的生成,細(xì)胞貼壁能力超強(qiáng)。 RAW 264.7細(xì)胞屬免疫細(xì)胞,有多種功能,是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對(duì)象。呈不規(guī)則形,貼壁;細(xì)胞生長(zhǎng)速度快,2-3天即可傳一代;營(yíng)養(yǎng)體系是DMEM+10%FBS。
表1 RAW 264.7細(xì)胞基本信息
名稱(chēng)
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RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)
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形態(tài)
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不規(guī)則形
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生長(zhǎng)特性
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貼壁;細(xì)胞生長(zhǎng)速度快,2-3天即可傳一代
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營(yíng)養(yǎng)體系
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DMEM+10%FBS+1%PS
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圖1 RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)
首先我們討論的第一大問(wèn)題是胰酶消化對(duì)RAW264.7細(xì)胞的刺激分化。如圖2所示:被胰酶消化過(guò)的RAW 264.7細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的分化現(xiàn)象呈多角形,有較長(zhǎng)觸角。
圖2 分化的RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)
如何避免細(xì)胞傳代因胰酶而受刺激分化,刮取是比較合適的方法。把細(xì)胞培養(yǎng)液倒掉,加入37℃遇溫的PBS,然后刮細(xì)胞,食指和拇指夾緊細(xì)胞刮,細(xì)胞刮橡膠頭刮面切面與平皿平行,用腕力輕輕刮(注意用腕力刮,不要用臂力),切記只能刮一次,不要來(lái)回刮和反復(fù)刮,吹打的力度一定要輕,切勿暴力吹打。
接下來(lái)我們討論的第二種情況是為啥RAW 264.7換了血清批次后聚團(tuán)嚴(yán)重?如圖3所示:換血清批次后嚴(yán)重聚團(tuán)的RAW 264.7細(xì)胞,呈片狀分部,片層之間間隔明顯。
圖3 更換血清批次后嚴(yán)重聚團(tuán)的RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)
如果您剛好也碰到這種情況,那不妨來(lái)了解一下血清批間差:血清來(lái)源于動(dòng)物,其組成成分有1000種左右,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏哪挲g、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件而異。每個(gè)批號(hào)的組分百分比含量都是不固定的,所以批間差異是存在的。RAW 264.7細(xì)胞本身有聚團(tuán)生長(zhǎng)特性,但嚴(yán)重聚團(tuán)可能受到血清里的某些因子刺激。
怎樣預(yù)防血清批間差導(dǎo)致的細(xì)胞聚團(tuán)呢?先用血清試用裝,試用效果好,可購(gòu)買(mǎi)和血清試用裝批次相同的正裝,囤積半年或一年的用量,有效避免批間差對(duì)細(xì)胞的影響(胎牛血清在-20℃保存可達(dá)5年)。
最后咱們討論的第三大問(wèn)題是有分化的細(xì)胞說(shuō)明細(xì)胞狀態(tài)不好嗎?如圖4所示,細(xì)胞群中有個(gè)別細(xì)胞出現(xiàn)觸角。

圖4 個(gè)別分化的RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)
值得一提的是培養(yǎng)時(shí),無(wú)法保證100% 不分化,通過(guò)傳代可以將分化比例控制在一定范圍。RAW264.7細(xì)胞生長(zhǎng)速度快,2-3天即可傳一代, 傳代時(shí)間間隔超過(guò)3天更容易分化,很難吹下,每一次接種密度都要控制好。推薦傳代比例為1:3—1:6;推薦傳代時(shí)間:2—3天;推薦傳代融合率:80%-90%
看了這么多長(zhǎng)觸角的細(xì)胞,我們來(lái)看看“馬相”還不錯(cuò)的RAW 264.7細(xì)胞吧。如圖5和圖6所示,生長(zhǎng)良好的RAW 即使融合度達(dá)到很高仍不分化,胞體邊界感清晰,各個(gè)喂得圓鼓鼓、胖嘟嘟的,時(shí)刻準(zhǔn)備著為人類(lèi)生命科學(xué)研究而“獻(xiàn)身”。
圖5和圖6 長(zhǎng)勢(shì)良好的RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)
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