外泌體制備過程主要關鍵步驟及常用實驗室設備
外泌體是蛋白質、脂質和核酸的天然載體，在細胞間通訊中起著至關重要的作用。外泌體包含各種膜蛋白，例如內體相關蛋白（Alix、Tsg101 和 Rab 蛋白）、四跨膜蛋白（CD63、CD81、CD82、CD53 和 CD37）和脂筏相關蛋白（糖基磷脂酰肌醇和 flotillin）。隨著近年來生物技術、實驗室設備的不斷發(fā)展，外泌體有著廣泛的應用前景，包括藥物發(fā)現(xiàn)、配體篩選和靶向藥物遞送。
進而即用型、高質量的功能性外泌體的需求也越來越顯明，這種工業(yè)外泌體生產需要通過大規(guī)模外泌體制備和純化來實現(xiàn)。
外泌體制備過程主要分為以下幾個關鍵步驟：
1.上游生產 —— 用于外泌體制造的細胞系的培養(yǎng)和擴增。選擇特定的細胞系它進行細胞的傳代培養(yǎng)和培養(yǎng)擴增才能產生大量用于外泌體生產的細胞。通常，規(guī)模化擴培，可以使用生物反應器進行分批補料培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)時采用無血清培養(yǎng)基可用于減少污染并有助于外泌體純化。
2.外泌體分離和純化——當前外泌體的分離方法主要包括：差速離心法、TFF切向流過濾法、密度梯度離心、空間排阻色譜法(SEC)、聚合物沉淀和免疫親和等方法。為了提高外泌體的濃度和質量，超速離心、微濾法、空間排阻色譜 (SEC)法 和免疫親和等技術多用于外泌體純化。
3.外泌體分析——為了清楚了解您的外泌體質量、大小、形態(tài)、特點還需要對外泌體進行進一步分析研究，在外泌體表征一般會使用流式細胞(FACS)多色分析、凝膠電泳western blot（WB）、ELISA等標記分析和組織學分析。外泌體質量大小、形態(tài)分析主要使用的實驗設備包括、納米粒度儀、透射電子顯微鏡 (TEM)、納米粒子跟蹤分析儀 (NTA)等。
4.凍干外泌體—— 雖然實驗室中常規(guī)的外泌體存儲條件為4℃、-20℃、-80℃。 但外泌體存儲在-80°C將不利于其運輸及應用，而采用外泌體凍干技術不僅可以在室溫條件下穩(wěn)定保存還可以改善藥物遞送載體脂質體的長期穩(wěn)定性。
外泌體制備過程中常用的實驗室設備：
傳統(tǒng)的外泌體產生的細胞作為靜態(tài)系統(tǒng)在燒瓶中培養(yǎng)，這限制了培養(yǎng)環(huán)境參數(shù)的控制和進一步提高產量。所以大規(guī)模的外泌體制備或者外泌體工業(yè)化生產常使用動態(tài)培養(yǎng)系統(tǒng)，比如：會使用搖瓶、旋轉瓶、滾瓶和生物反應器作為可選的外泌體制造設備。
由于在生物反應器中配置了穩(wěn)定可靠的動態(tài)監(jiān)控系統(tǒng)，可以實時控制 CO2、O2、pH 值等培養(yǎng)環(huán)境. 不僅在培養(yǎng)規(guī)模上有所擴展，而且細胞培養(yǎng)環(huán)境也得到了較大的改善。尤其是微載體生物反應器采用了提升式攪拌槳，較大程度地降低了細胞剪切力，溫控系統(tǒng)采用夾套和罐內雙溫度PID控制控溫精準度可達0.1°C。
蘇州阿爾法生物提供生物反應器廣泛應用于制備外泌體的細胞規(guī)�；瘮U培等外泌體制造的上游生產。同時提供，振蕩培養(yǎng)箱、高速離心機、低速離心機、電泳儀、電泳槽、紫外分光光度計、流式細胞儀、納米粒度儀等實驗室設備 廣泛應用于外泌體制備的各個階段.
進而即用型、高質量的功能性外泌體的需求也越來越顯明，這種工業(yè)外泌體生產需要通過大規(guī)模外泌體制備和純化來實現(xiàn)。
外泌體制備過程主要分為以下幾個關鍵步驟：
1.上游生產 —— 用于外泌體制造的細胞系的培養(yǎng)和擴增。選擇特定的細胞系它進行細胞的傳代培養(yǎng)和培養(yǎng)擴增才能產生大量用于外泌體生產的細胞。通常，規(guī)模化擴培，可以使用生物反應器進行分批補料培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)時采用無血清培養(yǎng)基可用于減少污染并有助于外泌體純化。
2.外泌體分離和純化——當前外泌體的分離方法主要包括：差速離心法、TFF切向流過濾法、密度梯度離心、空間排阻色譜法(SEC)、聚合物沉淀和免疫親和等方法。為了提高外泌體的濃度和質量，超速離心、微濾法、空間排阻色譜 (SEC)法 和免疫親和等技術多用于外泌體純化。
3.外泌體分析——為了清楚了解您的外泌體質量、大小、形態(tài)、特點還需要對外泌體進行進一步分析研究，在外泌體表征一般會使用流式細胞(FACS)多色分析、凝膠電泳western blot（WB）、ELISA等標記分析和組織學分析。外泌體質量大小、形態(tài)分析主要使用的實驗設備包括、納米粒度儀、透射電子顯微鏡 (TEM)、納米粒子跟蹤分析儀 (NTA)等。
4.凍干外泌體—— 雖然實驗室中常規(guī)的外泌體存儲條件為4℃、-20℃、-80℃。 但外泌體存儲在-80°C將不利于其運輸及應用，而采用外泌體凍干技術不僅可以在室溫條件下穩(wěn)定保存還可以改善藥物遞送載體脂質體的長期穩(wěn)定性。
外泌體制備過程中常用的實驗室設備：
傳統(tǒng)的外泌體產生的細胞作為靜態(tài)系統(tǒng)在燒瓶中培養(yǎng)，這限制了培養(yǎng)環(huán)境參數(shù)的控制和進一步提高產量。所以大規(guī)模的外泌體制備或者外泌體工業(yè)化生產常使用動態(tài)培養(yǎng)系統(tǒng)，比如：會使用搖瓶、旋轉瓶、滾瓶和生物反應器作為可選的外泌體制造設備。
由于在生物反應器中配置了穩(wěn)定可靠的動態(tài)監(jiān)控系統(tǒng)，可以實時控制 CO2、O2、pH 值等培養(yǎng)環(huán)境. 不僅在培養(yǎng)規(guī)模上有所擴展，而且細胞培養(yǎng)環(huán)境也得到了較大的改善。尤其是微載體生物反應器采用了提升式攪拌槳，較大程度地降低了細胞剪切力，溫控系統(tǒng)采用夾套和罐內雙溫度PID控制控溫精準度可達0.1°C。
蘇州阿爾法生物提供生物反應器廣泛應用于制備外泌體的細胞規(guī)�；瘮U培等外泌體制造的上游生產。同時提供，振蕩培養(yǎng)箱、高速離心機、低速離心機、電泳儀、電泳槽、紫外分光光度計、流式細胞儀、納米粒度儀等實驗室設備 廣泛應用于外泌體制備的各個階段.
