SDS-PAGE的工作原理

電泳是分離蛋白質(zhì)和核酸、嘌呤、嘧啶、一些有機(jī)化合物甚至無機(jī)離子等物質(zhì)的主要技術(shù)。大多數(shù)電泳方法是將樣品在一個(gè)固定化的介質(zhì)中進(jìn)行分離。聚丙烯酰胺凝膠是主要的介質(zhì)之一。聚丙烯酰胺是一種多孔凝膠，孔徑接近蛋白質(zhì)分子的大小，從而提高了蛋白質(zhì)的分辨率。此外，聚丙烯酰胺凝膠還具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性、強(qiáng)重復(fù)性、對(duì)pH和溫度變化的穩(wěn)定性，顏色易于觀察等優(yōu)點(diǎn)。十二脘基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrohoresis，SDS PAGE）在確定蛋白質(zhì)分子量，檢測(cè)特定蛋白質(zhì)和鑒定菌株種類方面具有操作簡(jiǎn)單和重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。

聚丙烯酰胺凝膠電泳示意圖（Gülay, et al.,2018）

如何通過SDS-PAGE確定蛋白質(zhì)的分子量？

SDS-PAGE是確定未知蛋白質(zhì)分子量的主要方法。已知分子量的蛋白質(zhì)和未知樣品同時(shí)電泳。染色后，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的相對(duì)遷移率和分子量的對(duì)數(shù)，可得到一條線，利用其相對(duì)遷移率確定未知樣品的分子量。在實(shí)驗(yàn)室中，將一個(gè)與染料共價(jià)偶聯(lián)的標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白質(zhì)用作參考蛋白質(zhì)，以大致指示未知蛋白質(zhì)的大小。這種預(yù)先染色的蛋白質(zhì)標(biāo)記可以在電泳過程中或轉(zhuǎn)移膜時(shí)直接觀察到。

如何讀取SDS-PAGE的結(jié)果？

電泳后，肉眼無法直接觀察到蛋白質(zhì)分離，需要后續(xù)的染色技術(shù)�？捡R斯亮藍(lán)染色和銀染是電泳分離蛋白質(zhì)常規(guī)檢測(cè)和定量的常用方法。經(jīng)過簡(jiǎn)單的處理，如固定-染色-脫色，可以清楚地觀察到蛋白質(zhì)的分布。隨著高靈敏蛋白質(zhì)分析方法和蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)的改進(jìn)，熒光標(biāo)記和同位素標(biāo)記技術(shù)等新的染色方法大大提高了靈敏度，并且還與自動(dòng)蛋白質(zhì)組學(xué)平臺(tái)凝膠切割技術(shù)兼容，開發(fā)了更高的靈敏度和自動(dòng)染色技術(shù)。

如何儲(chǔ)存SDS-PAGE凝膠？

通常在每次實(shí)驗(yàn)之前會(huì)準(zhǔn)備新鮮的SDS-PAGE凝膠。但是，凝膠也可以在4°C的清水中儲(chǔ)存大約一周。如果在染色后無法及時(shí)拍照，則需要將其放入水中以防止凝膠干燥和收縮。建議盡快拍攝染色結(jié)果。如果將凝膠長(zhǎng)時(shí)間浸泡在水中，條帶會(huì)散開。

參考文獻(xiàn)

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