貼壁細胞培養(yǎng)的常見問題及解決方案

01貼壁細胞培養(yǎng)，細胞不貼壁
可能原因：胰蛋白酶消化過度；支原體污染；培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；細胞老化；接種細胞起始濃度太低或太高。
解決方法：縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2；啟用新的保種細胞；調(diào)節(jié)最佳接種細胞濃度。
 
02懸浮細胞成簇
可能原因：培養(yǎng)液中含鈣,鎂離子；支原體污染；蛋白酶過度消化使得細胞裂解；DNA污染。
解決方法：用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕巧吹吸細胞獲得單細胞懸液；分離培養(yǎng)物，檢測支原體；DNasel處理細胞。
 
03培養(yǎng)細胞生長緩慢
可能原因：由于更換不同培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細胞生長必須成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞；培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染；試劑保存不當(dāng)；接種細胞起始濃度太低；細胞已老化；支原體污染。
解決方法：比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗，讓細胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補加谷氨酰胺及生長因子；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；增加接種細胞起始濃度；換用新的保種細胞；分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。
 
04培養(yǎng)細胞生長不好
可能原因：
細胞本身的狀態(tài)
細胞傳代次數(shù)多，細胞老化；
細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；
細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；
胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未完全分離而成團，細胞死亡；
細胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速溶。
污染
支原體污染；
霉菌污染。
培養(yǎng)基或血清
更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證；
選擇的培養(yǎng)基是否合適；
培養(yǎng)基配制是否合適；
培養(yǎng)基配制是否準確無誤。
培養(yǎng)環(huán)境
CO2供應(yīng)是否正常；
培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。
解決方法：根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案
注意細胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)，接種量等：
避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)，合法，可朔源的血清）；
要用合適的血清或培養(yǎng)基，最好經(jīng)過驗證；
注意實驗室的環(huán)境。

05培養(yǎng)細胞死亡
可能原因：培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2；培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大；細胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷；培養(yǎng)液滲透壓不正確；培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積。
解決方法：檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；取新的保存細胞種；檢測培養(yǎng)液滲透壓；換入新鮮培養(yǎng)液。

關(guān)于我們
無錫耐思生命科技股份有限公司（以下簡稱“耐思”）于 2009 年成立，并創(chuàng)立 NEST 品牌，秉持“做高端耗材，創(chuàng)國際知名品牌”的信念，專注于生命科學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)品的研發(fā)與制造。耐思擁有 7500m2 十萬級潔凈車間，2500m2 萬級潔凈車間，成熟的生產(chǎn)工藝、先進的機器設(shè)備、專業(yè)的研發(fā)中心、資深的管理團隊，是國內(nèi)領(lǐng)先的醫(yī)療器械和生命科學(xué)領(lǐng)域耗材制造商。
2020 年，公司正式更名為無錫耐思生命科技股份有限公司。

美國分公司成立
隨著業(yè)務(wù)的發(fā)展，NEST 產(chǎn)品已遠銷北美、歐洲、日本、韓國、印度等全球多個國家，為了與海外客戶建立深厚的合作關(guān)系，并更快地將產(chǎn)品送到海外客戶手中， 我們于2003年在美國新澤西州成了了NEST美國分公司。NEST美國是屬于無錫耐思生命科技股份有限公司的分支機構(gòu)，擁有一支具有豐富經(jīng)驗和銷售技巧的專業(yè)團隊，能與客戶進行深入的溝通，更好更快地了解客戶需求，并給予專業(yè)的技術(shù)支持。2022年，NEST美國將在亞利桑那州鳳凰城開設(shè)一個新的48,000英尺的倉庫，隨著新倉庫的落成，將為客戶極大的降低了存儲與物流成本。

引進先進設(shè)備，確保品質(zhì)穩(wěn)定
耐思為確保質(zhì)量的穩(wěn)定，實現(xiàn)“原料采購 - 生產(chǎn) - 包裝 - 滅菌 - 交付”的無縫對接， 2012年投資1.5億新建了2.7萬平米廠房（無塵潔凈車間），且引進國際先進電子輻照設(shè)備RhodotronTT200（輻照滅菌流程經(jīng) ISO13485、ISO11137 質(zhì)量體系認證），進口符合USP CLASS 6的醫(yī)用級原材料，按GMP質(zhì)量管理規(guī)范標(biāo)準化生產(chǎn)，現(xiàn)已取得ISO 9001、ISO 13485、ISO 11137、FDA、CE 認證及醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證。
2021年NEST新增4500m2十萬級潔凈車間和1500m2萬級潔凈車間，用于醫(yī)療器械與醫(yī)藥包裝耗材的生產(chǎn)。
 
三大類產(chǎn)品——實驗室耗材、醫(yī)療器械、醫(yī)藥包裝耗材
耐思的產(chǎn)品分為三大類：實驗室耗材（細胞學(xué)類耗材、微生物檢測類耗材、分子生物學(xué)類耗材、通用耗材類）、醫(yī)療器械和醫(yī)藥包裝耗材。產(chǎn)品適用于醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、輕化工、食品、環(huán)保、生物能源、海洋生物資源、再生醫(yī)學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域，品項多、規(guī)格全，滿足了客戶不同的需求。相比進口耗材，NEST 貨期短、品質(zhì)優(yōu)、價格低，可大大提高工作效率并降低使用成本。