中性紅細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒使用說明

產(chǎn)品概述 product description
中性紅法細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒是利用細(xì)胞對中性紅的攝入能力來檢測細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性。中性紅可以被活細(xì)胞所攝入，并在溶酶體中積累。在細(xì)胞增殖加快時(shí)，細(xì)胞數(shù)量增多，可以攝入的中性紅的量就會(huì)增加。在細(xì)胞受到損傷時(shí)，中性紅的攝入能力會(huì)下降。這樣通過對于中性紅攝入量的不同就可以確定細(xì)胞的增殖或毒性情況。 可以提供細(xì)胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細(xì)胞代謝、氧化應(yīng)激、細(xì)胞膜流動(dòng)性、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細(xì)胞耗氧率、細(xì)胞內(nèi)pH、細(xì)胞粘附、細(xì)胞自噬等數(shù)百種檢測試劑盒產(chǎn)品。

保存溫度
2-8℃避光

注意事項(xiàng)
1.低溫保存后染色液可能出現(xiàn)結(jié)晶沉淀。
2.出現(xiàn)結(jié)晶可以37℃水浴溶解。

有效期
一年

檢測方法
酶標(biāo)儀

適用樣本
動(dòng)物細(xì)胞

產(chǎn)品應(yīng)用
酶標(biāo)儀

儀器準(zhǔn)備
1.帶有450nm濾光片的酶標(biāo)儀 2. CO2培養(yǎng)箱

試劑準(zhǔn)備
1.PBS 2.純水

耗材準(zhǔn)備
1.移液器及吸頭 2.96孔培養(yǎng)板

使用注意事項(xiàng)
1.中性紅染色液存放后會(huì)產(chǎn)生沉淀。出現(xiàn)結(jié)晶可以37℃水浴后搖勻溶解。染液是過量的，也可以直接吸取染色液的上清液使用，也可以使用針頭濾器等過濾去除沉淀后繼續(xù)使用，不會(huì)影響使用效果。
2.96孔板在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會(huì)存在蒸發(fā)問題。在加入中性紅染色液前，如果培養(yǎng)液存在明顯的蒸發(fā)問題，會(huì)影響細(xì)胞的生長狀態(tài)，并嚴(yán)重影響后續(xù)的檢測結(jié)果。
3.部分藥物可能對檢測有影響，有影響時(shí)需換液后檢測，無影響時(shí)直接檢測。用培養(yǎng)基或PBS來配制待檢測藥物，加入中性紅試劑，測藥物溶液在540處的吸光度。如果該吸光度與不含藥物僅加中性紅試劑的培養(yǎng)基或PBS吸光度差異不大，則可以直接加入中性紅，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的200ul培養(yǎng)基和20ul 中性紅進(jìn)行檢測。
4.如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液，或者為了去除其它顏色物質(zhì)的影響，建議設(shè)定690 nm作為參比波長，以O(shè)D540扣除參比波長的O.D值即可。

使用方法
活性測定使用方法：
1. 收集細(xì)胞，加細(xì)胞懸液200ul（約10000個(gè)細(xì)胞）到96孔板（邊緣孔用無菌水或PBS填充）。每板設(shè)對照（加200l培養(yǎng)基）。
2. 置37℃，5% CO2孵育過夜，倒置顯微鏡下觀察。
3. 每孔加入10 ul 待檢測藥物溶液， 37℃孵育。
4. 至待檢測時(shí)間點(diǎn)，每孔加入20 ul 中性紅溶液，37℃孵育1-4 小時(shí)。
5. 移除含有中性紅染色液的細(xì)胞培養(yǎng)基，用PBS、DPBS或HBSS等適當(dāng)溶液洗滌1-2次。
6. 加入200微升中性紅檢測裂解液，室溫?fù)u床上裂解20分鐘。在搖床上搖動(dòng)可以促進(jìn)樣品的裂解。
7. 測定540 nm各孔的吸光值。
8. 同時(shí)設(shè)置空白孔（培養(yǎng)基和中性紅溶液，無細(xì)胞），對照孔（不加藥培養(yǎng)基和中性紅溶液，有細(xì)胞），每組設(shè)定3-5復(fù)孔。

結(jié)果分析 ：
細(xì)胞活力計(jì)算：
將各測試孔的OD值減去調(diào)零孔OD值或?qū)φ湛譕D值。各重復(fù)孔的OD值取平均數(shù)。
細(xì)胞活力% =（加藥細(xì)胞OD-空白OD/對照細(xì)胞OD-空白OD）×100

常見問題分析
1.檢測時(shí)需要換液嗎？
如果待測藥物有還原性，需要換液，否則不需要。
2.如何判斷待測藥物是否含有還原性？
測定不含細(xì)胞，僅含有待測藥物的溶液加入中性紅反應(yīng)后的在540 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，說明待測藥物沒有還原性或還原性很小，對中性紅沒有影響，則可以不換液，在培養(yǎng)基中直接加入中性紅 ；如果吸光度相對較大，說明藥物具有較強(qiáng)的還原性，則需要除去含藥物的培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的200 μl培養(yǎng)基和20 μl 中性紅進(jìn)行檢測。