實驗常用的懸浮細(xì)胞去死細(xì)胞的方法介紹

還有 HL-60、K562、U937、U266 等都是我們在實驗室比較常見的懸浮細(xì)胞。在懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)過程中，根據(jù)整體細(xì)胞生長分裂的狀況可以將整個細(xì)胞培養(yǎng)周期分為四個時期：潛伏期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期、衰亡期。

進(jìn)入對數(shù)生長期的時候是細(xì)胞分裂最旺盛的時候，細(xì)胞活性也是最高，隨著分裂次數(shù)的增加，細(xì)胞代謝產(chǎn)物增加，細(xì)胞密度增大，到了對數(shù)生長期后期有一小部分細(xì)胞會出現(xiàn)凋亡的跡象。
 

進(jìn)入穩(wěn)定期后細(xì)胞密度達(dá)到最大，如果這個時候不及時補充營養(yǎng)更換新鮮培養(yǎng)基的話凋亡的細(xì)胞就會越來越多，即死細(xì)胞越來越多。如果死細(xì)胞太多的話會影響降低整體細(xì)胞活性，同時也會抑制影響正常細(xì)胞的生長代謝。如果涉及藥篩實驗等，死細(xì)胞比例更會大幅增加，實驗常用的懸浮細(xì)胞去死細(xì)胞的方法：
 

1. 磁珠標(biāo)記MACS(magnetic-activatedcellsorting)
原理就是用結(jié)合了磁珠的抗體去標(biāo)記細(xì)胞，讓目的細(xì)胞帶上磁珠，也可以正向選擇死細(xì)胞，通過磁場將結(jié)合了磁珠與沒結(jié)合磁珠的細(xì)胞分離開來。MACS 是細(xì)胞分選的重要手段，優(yōu)點是細(xì)胞活性好，缺點就是能分選的細(xì)胞類型有限，且成本較高。

2. 流式分選FACS（fluorescence-activatedcellsorting）
也就是流式分選，與流式分析一致。利用熒光素標(biāo)記不同的分子，通過調(diào)節(jié)合適的電壓、補償?shù)龋�通過熒光將目的細(xì)胞與非目的細(xì)胞區(qū)分開來。

3.活細(xì)胞短暫貼壁法

可以用一種叫 Con.A（刀豆球蛋白）來包被培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶，懸浮細(xì)胞中的活細(xì)胞可短暫貼壁，此時棄去上清，一段時間后，細(xì)胞又可以重新懸浮。市面上有一些經(jīng)過特殊處理的養(yǎng)貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)瓶也可達(dá)到這種效果，但是建議使用之前根據(jù)所養(yǎng)的懸浮細(xì)胞生長狀況測試一下分離效果。

4. 沉降法

部分懸浮細(xì)胞如 NK92 成團生長，成團的細(xì)胞狀態(tài)較好，單個細(xì)胞基本沒有增殖能力，根據(jù)這一特性，便可以將細(xì)胞懸液收集在離心管中，注意動作要輕柔，不要將細(xì)胞團吹散，將離心管直立，觀察離心管底出現(xiàn)“白霧”層時，可小心將上清去除，來收獲狀態(tài)良好的細(xì)胞團。
 

一般來說，懸浮細(xì)胞中的死細(xì)胞及細(xì)胞碎片的密度相對較低，此時，可以通過低速（500-800rpm）來去除一些上清中的死細(xì)胞，每次傳代或換液進(jìn)行此操作，使活細(xì)胞有生長優(yōu)勢，可以慢慢提高活細(xì)胞比例。