細(xì)胞分選方式的介紹與細(xì)胞分離陰選和陽(yáng)選的區(qū)別

1 細(xì)胞分選方式
細(xì)胞分選也稱為細(xì)胞的分離純化，是一種根據(jù)細(xì)胞所具有的特性把某種特定的細(xì)胞亞群從混合的細(xì)胞樣本中分離出來(lái)的技術(shù)，在體外診斷、治療和細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)研究等方面均具有重要作用。根據(jù)細(xì)胞的免疫特性和理化性質(zhì)，目前常見(jiàn)的細(xì)胞分選方式主要有以下三種：

（1）免疫磁珠分選：基于細(xì)胞表面抗原能與連接有特異性抗體磁珠結(jié)合的特性，在外加磁場(chǎng)作用下，細(xì)胞通過(guò)與磁珠上偶聯(lián)的抗體特異性識(shí)別而被吸附，在磁場(chǎng)中停留，從而達(dá)到細(xì)胞分離的目的。
 

圖1 ：免疫磁珠分選示意圖
 

（2）流式細(xì)胞分選：通過(guò)不同的熒光素標(biāo)記樣本中的一種或多種細(xì)胞，再經(jīng)由流式細(xì)胞儀區(qū)別不同細(xì)胞的相關(guān)參數(shù)（光散射和熒光特征），將不同細(xì)胞分離。
 

圖2：流式細(xì)胞分選示意圖
 

（3）密度梯度離心：用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過(guò)重力或離心力的作用使細(xì)胞分層、分離。
 

圖3：密度梯度離心示意圖

其中，免疫磁珠分選由于其所需設(shè)備簡(jiǎn)單，對(duì)技術(shù)人員要求不高，分選所得的細(xì)胞通量大、靈敏度高、純度好且細(xì)胞活性和復(fù)蘇率較好，對(duì)于下游應(yīng)用影響較小而被廣泛應(yīng)用。

2 細(xì)胞分選在細(xì)胞治療中的重要性
細(xì)胞療法是近些年醫(yī)藥研發(fā)中發(fā)展非常迅速的一個(gè)領(lǐng)域，是藥物開發(fā)一種全新的模式，它在癌癥、傳染病和自身免疫等疾病的治療方面展示出了巨大的潛力。并且，隨著國(guó)內(nèi)外政策的放行與大力支持，免疫細(xì)胞治療相關(guān)的各項(xiàng)臨床研究在全球相繼開展，細(xì)胞治療的相關(guān)企業(yè)也隨之興起。盡管近幾年細(xì)胞治療產(chǎn)品的細(xì)胞來(lái)源和種類不斷豐富，但針對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行改造的細(xì)胞療法目前仍占據(jù)整個(gè)細(xì)胞治療領(lǐng)域的主導(dǎo)位置。
 

圖4 ：臨床試驗(yàn)中的各種類型的細(xì)胞療法

T細(xì)胞的有效分選能夠減少病毒的用量，提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，節(jié)省成本。另外有研究顯示，T細(xì)胞分選能直接影響到CAR-T細(xì)胞的抗腫瘤活性，關(guān)系到后續(xù)T細(xì)胞的激活和擴(kuò)增，是CAR-T終產(chǎn)品質(zhì)量的保證。

3 細(xì)胞分離陰選和陽(yáng)選的區(qū)別
免疫磁珠細(xì)胞分選根據(jù)所標(biāo)記細(xì)胞的不同大致可分為陽(yáng)性分選（正選）和陰性分選（負(fù)選）：

陽(yáng)選（正選）：通常是指對(duì)目的細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，使其滯留在磁場(chǎng)中，直接獲得目的細(xì)胞。陽(yáng)性選擇是最廣泛驗(yàn)證、靈活有效的方法，理論上來(lái)講只要有目的明確的細(xì)胞表面標(biāo)記物，我們都可以用細(xì)胞陽(yáng)性選擇的方法識(shí)別抓取，在非常極端的情況下，比如非常稀的細(xì)胞、弱表達(dá)的細(xì)胞表面標(biāo)記物、充分徹底去除特定細(xì)胞群都應(yīng)考慮陽(yáng)性分選。

陰選（負(fù)選）：通常是指對(duì)非目的細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記和去除得到目的細(xì)胞。避免通過(guò)直接地標(biāo)記目的細(xì)胞（比如使用表面特異性抗體標(biāo)記），從而來(lái)減少細(xì)胞活化的可能。
 

4 T細(xì)胞分離陰選和陽(yáng)選的選擇
在免疫防御中，T細(xì)胞有著不可替代的作用。在過(guò)去十多年時(shí)間里，T細(xì)胞治療在臨床試驗(yàn)中突飛猛進(jìn)，取得了前所未有的突破。目前T細(xì)胞主要的分選策略有兩種：一是以納米級(jí)別磁珠為基礎(chǔ)的分選，主要策略包括有CD4/CD8的分選或CD3的分選，而后聯(lián)合使用納米級(jí)別CD3/CD28激活試劑；二是以微米級(jí)別磁珠直接偶聯(lián)CD3/CD28抗體對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行分選及激活。

而如何選擇T細(xì)胞的分選方式，陰選還是陽(yáng)選，表征Marker的確定，這就取決于具體的下游應(yīng)用和生產(chǎn)工藝的考量。在選擇合適的分選方式時(shí)，應(yīng)該慎重考量下游研究應(yīng)用是否必須使用未標(biāo)記的細(xì)胞，與細(xì)胞表面蛋白結(jié)合的磁珠或者抗體是否會(huì)影響下游的應(yīng)用等因素。此外，獲得的目的細(xì)胞的純度、活率和回收率是否符合工藝要求，也是選擇分選方式需要考量的地方。

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