BMG酶標(biāo)儀使用教程系列：閃光次數(shù)如何影響測量結(jié)果

瀏覽次數(shù)：1306　發(fā)布日期：2023-8-25　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

對于所有需要光源的檢測模式，微孔板讀板機(jī)通常會顯示“閃爍次數(shù)”的設(shè)置項。這包括熒光強(qiáng)度和吸光度測量。然而，這種設(shè)置與發(fā)光無關(guān)，因為這種類型的測量不需要激發(fā)光。

但是閃光次數(shù)如何影響測量？在哪些情況下，低閃光次數(shù)或高閃光次數(shù)有益？

圖1：基于熒光的分析的光源和檢測系統(tǒng)

你知道嗎？
飛行模式是測量微孔板的最快方法。與上面顯示的一次閃光測量不同，當(dāng)載板系統(tǒng)連續(xù)運(yùn)動時，飛行模式每孔閃光一次，最快讀板時間只需14秒。

你知道嗎？
如果數(shù)據(jù)點(diǎn)采集之間的時間間隔太短，BMG LABTECH控制軟件會將其調(diào)整為盡可能小的間隔設(shè)置，以適應(yīng)所選的閃光次數(shù)。

您的微孔板讀板機(jī)將在每次測量中至少用1個閃光激發(fā)樣本、檢測發(fā)射光并繼續(xù)下一個樣本。如果您在設(shè)置中選擇了1個以上的閃光，則檢測到的發(fā)射光信號為這幾次檢測的平均值。盡管先進(jìn)的讀板機(jī)具有較高的閃光頻率，但儀器測量樣本所需的時間會隨著閃光次數(shù)的增加而增加。這也影響了讀板所需的總時間，這在以數(shù)據(jù)點(diǎn)采集之間的最小時間間隔執(zhí)行快速動力學(xué)時尤其關(guān)鍵。因此，在進(jìn)行動力學(xué)實(shí)驗時，應(yīng)考慮設(shè)定的閃光次數(shù)，并將其調(diào)整到合適的水平。

圖2：閃爍次數(shù)對測量時間的影響

本案例將96孔板和384孔板所需的總測量時間與所用閃爍次數(shù)進(jìn)行比較。測量時間隨著每次測量使用的閃爍次數(shù)而增加，而與使用的微孔板格式無關(guān)。然而，在較小的板格式（如384和1536孔板）中有更高數(shù)量的測量樣本時，總測量時間相對于所用閃爍次數(shù)的增加將更明顯（例如，96孔中50和200次閃爍之間增加2倍，而384孔板增加3倍）。請注意，測量時間也因讀板機(jī)型號和制造商而異。

閃光的總次數(shù)也會影響光源的激發(fā)強(qiáng)度。用于BMG LABTECH微孔板讀板機(jī)的氙光燈具有非常長的壽命。即使在100000000次閃光之后，它們?nèi)匀槐３制浒l(fā)射強(qiáng)度的50%。

你知道嗎？
BMG LABTECH的線上文檔庫包含各種各樣的應(yīng)用說明，這些說明不僅突出了我們的微孔板讀板機(jī)在常用分析上的性能，還提供了讀板機(jī)設(shè)置的建議，例如閃爍次數(shù)。

如何調(diào)整BMG LABTECH讀板機(jī)上的閃爍次數(shù)？

BMG LABTECH讀板機(jī)上測試程序的閃爍次數(shù)設(shè)置可以在“管理程序”選項卡下進(jìn)行調(diào)整。只需打開要修改或創(chuàng)建新程序即可。現(xiàn)在，您可以將“速度和精度”刻度上的滑塊移動到三個位置之一（快速、中間和精確）。這樣，將自動選擇推薦的預(yù)設(shè)值�；蛘�，點(diǎn)擊“高級”按鈕手動調(diào)整閃爍次數(shù)，范圍從0到200。

那么，為什么你不能總是使用盡可能少的閃光燈進(jìn)行測量，并盡可能縮短測量時間呢？答案是，這會影響數(shù)據(jù)的可變性！微孔板讀板機(jī)在每次附加閃光之后獲取所產(chǎn)生的發(fā)射信號。通過多次閃爍檢測樣本，微孔板讀板機(jī)可以獲得每個數(shù)據(jù)點(diǎn)的平均值。這提高了數(shù)據(jù)穩(wěn)定性，并減少了由每次閃光間變化引起的可變性。特別是，低濃度樣品和空白樣品受益于更高的閃光次數(shù)，因為減少的可變性有助于減少背景噪聲（圖3）。

圖3：熒光基團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)品（0.001至1 nM）相對于所用閃光次數(shù)的%CV值

該示例強(qiáng)調(diào)了閃光次數(shù)對熒光基團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)系列的變異系數(shù)（%CV）值的影響。雖然低至0.1nM的高熒光基團(tuán)濃度的%CV保持在1-2%的低水平，但較低濃度的熒光基團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)樣品和空白樣品顯著變高。通過增加閃爍次數(shù)，可以顯著降低低濃度標(biāo)準(zhǔn)品和空白品的%CV。使用10-20次或更高的閃光次數(shù)可以使得所有測試樣品的%CV值降低到約為3%或更低。

通常不建議每次測量都使用盡可能多的閃爍次數(shù)（例如200次）。在某一閃光數(shù)之后，它只會人為地增加測量時間，而不會進(jìn)一步提高數(shù)據(jù)質(zhì)量。此外，它還會縮短光源的使用壽命。對于許多測定，10-50次閃光就足夠了。更高的設(shè)置可能有利于特定的應(yīng)用程序。

結(jié)論

為您的分析選擇適當(dāng)數(shù)量的閃光次數(shù)可確保數(shù)據(jù)的可靠性和準(zhǔn)確性。它不僅有助于保持較低的變異系數(shù)（%CV）和標(biāo)準(zhǔn)偏差，而且還可以減少檢測時間，同時延長微孔板讀板機(jī)光源的壽命。

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