如何選擇適合的外泌體提取方法詳解

瀏覽次數(shù)：677　發(fā)布日期：2023-9-7　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

超速離心法、尺寸排阻分離法、超濾法，還有沉淀法，面對(duì)眾多的外泌體分離方法，究竟怎樣確定哪種方法是最適合后續(xù)實(shí)驗(yàn)分析呢？

梅奧醫(yī)學(xué)中心的科研工作者們利用糞便上清分離胞外囊泡（EV），用于結(jié)直腸癌早期診斷。他們?cè)u(píng)估了五種EV分離方法（超速離心[UC]、沉淀[EQ -O、EQ-TC]、尺寸排阻分離柱[SEC]和超濾[UF]）的總回收率、重現(xiàn)性、純度、RNA組成和糞便上清液中的蛋白質(zhì)表達(dá)。

為了估計(jì)EV的直徑，研究人員使用Apogee Micro-Plus納米流式細(xì)胞儀獲取散射光數(shù)據(jù)，并將每個(gè)珠群的側(cè)散射強(qiáng)度轉(zhuǎn)換為納米，獲得EV的直徑。為了測(cè)量EV分離/富集方法的回收效率，他們比較了分離/富集前后五個(gè)糞便樣本的顆粒數(shù)，觀察到超濾和尺寸排阻分離柱是回收顆粒的最有效方法。

通過Western blot分析發(fā)現(xiàn)超速離心法和尺寸排阻分離柱獲得更高的顆粒與蛋白比。根據(jù)提取的RNA純度的分析顯示，尺寸排阻分離柱是最--好的EV分離方法。

研究人員在測(cè)試的五種技術(shù)中，認(rèn)為尺寸排阻分離柱是基于回收率和純度參數(shù)的最適合糞便上清液的EV分離方法。在未來，該方法可用于研究糞便衍生的EVs，作為生物標(biāo)志物的潛在來源，以提高結(jié)直腸癌變之前的檢測(cè)。

qEV尺寸排阻分離柱是由新西蘭IZON公司研發(fā)和生產(chǎn)的一種基于尺寸排阻色譜法（Size Exclusion Chromatography, SEC）原理的外泌體分離-純化技術(shù)。該技術(shù)具有簡(jiǎn)便、快速、容易標(biāo)準(zhǔn)化操作的特點(diǎn)，只需要15min就可以從多種類型樣本中提取到完整的高純度外泌體。相較于其他方法，qEV所提取的外泌體純度更高、濃度更高、活性也更高，還可以重復(fù)使用。qEV分離的外泌體尤其適用于外泌體蛋白組和外泌體功能實(shí)驗(yàn)。

Apogee Micro-Plus納米流式細(xì)胞儀（nFCM）可以分辨尺寸范圍為80nm至1300nm的聚苯乙、烯和二氧化硅微球，專門為檢測(cè)納米級(jí)小顆粒設(shè)計(jì)，非常適合細(xì)胞外囊泡、外泌體、大病毒和納米顆粒的分析，能快速獲取樣本中細(xì)胞外囊泡的尺寸信息，準(zhǔn)確濃度以及生物標(biāo)志物的表達(dá)。

純度高，活性好的樣本是細(xì)胞外囊泡功能分析的基礎(chǔ)，檢測(cè)速度快，準(zhǔn)確度高是分析細(xì)胞外囊泡的有力工具，歡迎前來伯齊科技咨詢qEV尺寸排阻分離柱和Apogee納米流式細(xì)胞儀。