稀釋內(nèi)毒素標準品需要旋渦振蕩的原因介紹

為什么對標準內(nèi)毒素的稀釋有如此特殊的要求呢?這與內(nèi)毒素的化學成分與結(jié)構有關。

LPS是具有疏水和親水雙重活性的兩性分子；多糖鏈具有親水性；脂肪鏈具有疏水性。內(nèi)毒素溶于水或稀釋時，LPS的親水性糖鏈朝向水和水接觸，而疏水性的脂質(zhì)鏈部分卻背向水，這樣，LPS的疏水端自然聚集成團，形成直徑約為0.1μm的雙層殼狀或泡囊。脂質(zhì)A藏于聚集團的內(nèi)部或貼附于器皿上，而脂質(zhì)A是激活堂試劑的主要部分，在水溶液中，由于其疏水性而不能與鱟試劑充分接觸，造成檢測到的內(nèi)毒素含量偏低。若是檢測前利用旋渦裝置充分振蕩，可以使貼附于器皿上的內(nèi)毒素分子脫落，使聚集團的相對分子質(zhì)量下降。經(jīng)振蕩后的內(nèi)毒素溶液重新靜置一段時間后，內(nèi)毒素仍然會聚集成團或貼附于器皿壁上，所以樣品存放一段時間后，在使用前仍需充分振蕩。

實驗表明，同一批號的國家參考標準內(nèi)毒素在稀釋時震蕩與否結(jié)果相差很大。若采用旋渦震蕩法稀釋內(nèi)毒素，效價測定的結(jié)果與國際參考標準內(nèi)毒素（IS）基本一致；若不經(jīng)振蕩稀釋，則測定的效價要比國際參考標準內(nèi)毒素低50%～75%。所以，內(nèi)毒素在稀釋時一定要充分振蕩，才能得到所標示的效價。在實施1995年版的《中國藥典》前，我國相當部分的鱟試劑在標定靈敏度時，沒采用振蕩稀釋內(nèi)毒素的方法，導致標定的靈敏度高于實際值100%~300%。也就是說，鱟試劑用戶在使用比標示靈敏度高1～3倍的堂試劑做細菌內(nèi)毒素檢查。