Moxi GO II快速流式細胞儀在CAR-T療法中的應用
隨著對腫瘤研究的不斷深入及治療技術的不斷發(fā)展，其臨床治療手段包含了傳統(tǒng)的手術、放療、化療，靶向治療和綜合治療，再到近些年的免疫治療，皆為了清除腫瘤、“治愈”癌癥。其中，在2012年成功治愈白血病女孩Emily的嵌合抗原受體T細胞（CAR-T）療法備受矚目。
- 何為CAR-T療法？
嵌合抗原受體T細胞（CAR-T）療法，英文全稱Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，是一種治療腫瘤的精準靶免疫療法，是一種極有前景的細胞免疫療法。
CAR-T療法通過基因工程技術將T細胞激活，給其裝上定位導航裝置CAR（腫瘤嵌合抗原受體），將T細胞改造成“超級戰(zhàn)士”，即CAR-T細胞，專門識別并高效消滅腫瘤細胞，從而達到治療惡性腫瘤的目的（圖1）。與傳統(tǒng)藥物或化療相比，CAR-T療法對腫瘤細胞的殺傷更為精準，在提高療效的同時大幅減輕了毒副作用，在臨床腫瘤治療，尤其是血液腫瘤的治療上取得了顯著效果。隨著研究的進展，新靶點的不斷發(fā)現，CAR-T療法在實體瘤領域也有著卓越的進步。
圖1. CAR-T療法原理示意圖
- CAR-T療法的基本流程
標準的CAR-T治療流程一般持續(xù)5周左右，主要分為7步：
- Moxi GO II在CAR-T療法中的應用
CAR-T療法過程非常復雜和高端，涉及T細胞的篩選收集、基因改造、活化、培養(yǎng)、擴增、修飾等，每一步都需要精心的設計和質量控制，哪一步出現差錯都會影響CAR-T療法。細胞的精確計數和體積的精準測量對確保療法的成功起著至關重要的作用。
- CAR-T療法中需要細胞計數和體積測定的步驟：
圖2. CAR-T療法的基本流程
1） 外周血單核細胞（PBMC）的采集
通常采用全自動血細胞分離機從患者血液中分離采集PBMC，作為CAR-T細胞改造的起始原料。在此過程中，精確的細胞計數、細胞活率檢測對于確定細胞濃度和確保后續(xù)步驟有足夠數量的高質量細胞至關重要。Moxi GO II快速流式細胞儀采用庫爾特原理結合熒光流式檢測，提供精確的細胞絕對計數和細胞活率檢測。
2） T細胞的分離
接下來進一步用磁珠從PBMC中分離足夠的高質量T細胞。此過程中，細胞的數量和細胞的純度非常重要。細胞數量影響后續(xù)制造過程中的計算和調整，而細胞純度會直接影響CAR-T終產品的質量。比如，T細胞中混入B細胞雜質，可能會導致病人對CAR-T療法產生抗性。Moxi GO II快速流式細胞儀可在數秒內完成給出細胞濃度和細胞大小分布結果，為產品評估提供數據支撐。
3） T細胞的激活、擴增、轉導和CAR-T細胞的收獲
這一步是為了產生足夠多的CAR-T細胞用于治療。T細胞的激活窗口很短，監(jiān)測細胞何時準備好十分關鍵，細胞體積是T細胞活化狀態(tài)的關鍵指標。研究者通過監(jiān)測激活后的T細胞體積，可以比較不同激活方式的差異；通過監(jiān)測T細胞體積達到某一程度時再進行轉導，可以更好地控制CAR基因的轉入時間，提高轉導成功率。Moxi GO II快速流式細胞儀采用庫爾特原理對細胞大小和體積進行檢測，無需標記，幾秒內即可給出結果，隨時監(jiān)測細胞狀態(tài)。
準確的細胞計數、活率測定也是這些過程所必須的，監(jiān)測細胞生長、增殖和活力，優(yōu)化轉導效率，對于確定CAR-T細胞產物的產量和生存能力至關重要。采用Moxi GO II快速流式細胞儀可輕松實現這一目標。
4） CAR-T細胞的質控
在CAR-T產品回輸之前，需要對其進行全面嚴密的質控，包括細胞活力、細胞濃度和細胞大小分布評估。細胞計數和大小測定是評估最終產品效力、純度和整體質量的關鍵。細胞大小的偏差會影響其功能和效力。Moxi GO II快速流式細胞儀可在數秒內完成準確的絕對計數和精準的粒徑測量，可在CAR-T產品的質控過程中發(fā)揮穩(wěn)定可靠的作用。
綜上可以看出，在整個CAR-T流程中，細胞計數和大小測定在監(jiān)測細胞群、優(yōu)化過程和確保CAR-T細胞療法的可靠一致性方面發(fā)揮著關鍵作用。準確的細胞分析能夠優(yōu)化給藥、質量控制，最終獲得更好的療效。Moxi GO II快速流式細胞儀完美滿足以上CAR-T研究中所需的所有細胞分析需求。作為世界上唯一一款將庫爾特原理和雙熒光檢測技術相結合的儀器，Moxi GO II可以在幾秒內提供精確的細胞數量和體積數據（CV <3%），同時還可滿足基于熒光檢測的活率分析，GFP表達，表型分析等，集細胞計數和流式應用與一體，為研究者提供了極大的便利。
Moxi GO II快速流式細胞儀
Moxi GO II采用庫爾特原理進行細胞計數和粒徑測量，同時采用488nm激光光源，結合兩個PMT通道，525/45nm通道和561nm/LP（或者646nm/LP，可根據需要更換），進行細胞活率、細胞凋亡、轉染效率、活性氧簇、線粒體膜電位等常規(guī)流式檢測。儀器設計小巧輕便，無需預熱，開機即用，預設程序，觸屏操控，運行后10秒即可給出測試結果，使用后也無需清潔維護。無論是經驗豐富的流式專家，還是初試身手的實驗小白，Moxi Go II都可以助您輕松完成實驗。
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