抗體定性定量鑒定和抗體測序技術在紅斑狼瘡檢測中的應用
紅斑狼瘡，一種被稱為“不死的癌癥”的免疫性疾病，最近因為著名演員周海媚的不幸去世而再次引起了公眾的廣泛關注。紅斑狼瘡到底是一種什么��？對人體有哪些危害？為什么人們紛紛聞之喪膽？今天我們一起來聊聊這個話題。
紅斑狼瘡是一種慢性自身免疫疾病，其特點是免疫系統(tǒng)產生的多種抗體錯誤地攻擊自身的組織和器官，包括皮膚、關節(jié)、腎臟、心臟、肺部和神經系統(tǒng)等。機體的免疫系統(tǒng)是幫我們抵擋和消滅病原物質的，而現(xiàn)在卻攻擊自身的組織和器官，這無疑是自己朝自己開槍，后果可想而知。紅斑狼瘡的確切原因目前仍不完全清楚，但認為遺傳因素、環(huán)境因素和激素等都可能與其發(fā)病有關。隨著病情的發(fā)展導致多種癥狀，例如疲勞、關節(jié)疼痛、皮疹等，嚴重時甚至危及生命。目前還沒有根治紅斑狼瘡的方法，患者需要長期面對與病魔的斗爭。
圖1. 系統(tǒng)性紅斑狼瘡
由于紅斑狼瘡的癥狀與許多其他疾病相似，確診往往困難重重。臨床上除了結合病人的臨床癥狀外，對相關抗體的檢測也至關重要。絕大多數紅斑狼瘡患者血液中都有抗核抗體（ANA），雖然ANA測試不是特異性的，但它通常是篩查紅斑狼瘡的第一步。此外，抗雙鏈DNA抗體、抗Smith（Sm）抗體等特異性自身抗體的檢測也非常具有重要的診斷性意義。因此，精確識別特定的自身抗體對于診斷和治療至關重要。百泰派克生物科技（BTP）的抗體相關技術，特別是在抗體定性定量鑒定和抗體測序方面，為研究和治療紅斑狼瘡提供了重要的工具。這些技術不僅有助于識別和分析導致紅斑狼瘡的自身抗體，還可以提供關鍵的生物標志物，為疾病的診斷和治療提供重要信息。
一、抗體定性定量鑒定
百泰派克生物科技使用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質譜平臺，Orbitrap Fusion質譜平臺，Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC納升色譜技術，可對抗體進行精確的定性和定量鑒定。該技術可用于檢測和量化血液或其他生物樣本中特定抗體的存在和濃度。通過這種分析，研究人員可以了解哪些自身抗體與紅斑狼瘡的發(fā)病機制有關，以及它們在不同疾病階段的濃度變化。
圖2. BTP基于質譜的蛋白鑒定示例
技術流程：
1.樣本準備：
收集血液或其他生物樣本。通過離心等方法分離血清或血漿，因為抗體主要存在于這些液體中。
2.樣本處理：
抗體提取：從血清或血漿中提取總抗體蛋白。
抗體化和濃縮：如果需要，使用免疫親和層析或其他純化技術進一步純化特定抗體。
酶解切割：將抗體蛋白樣品用酶（如胰蛋白酶）處理，生成肽段。
肽段純化：使用固相萃取（SPE）等方法純化肽段。
脫鹽處理：通過脫鹽柱或其他方法去除樣品中的鹽分。
3.質譜分析：
液相色譜-質譜（LC-MS）聯(lián)用：利用液相色譜對肽段進行分離，并通過質譜進行檢測。
數據獲�。嘿|譜儀通常會記錄多種肽段的質荷比（m/z）和強度信息。
4.數據分析：
定性鑒定：使用質譜數據與已知的蛋白質數據庫進行比對，以鑒定特定的自身抗體。
定量分析：通過比較不同樣本中相應肽段的相對強度進行定量分析。
二、抗體測序：
抗體測序技術能夠確定特定抗體的精確氨基酸序列。這對于理解抗體如何與自體組織發(fā)生相互作用，導致免疫反應異常至關重要。此外，這一信息對于開發(fā)針對性的治療方法，如單克隆抗體療法，有著重要意義。BTP基于目前世界上分辨率最高的質譜儀器Obitrap Fusion Lumos，結合豐富的生物信息學分析經驗，建立了全新一代抗體測序平臺，能夠實現(xiàn)對抗體一級結構快速準確的分析。該平臺適用于不同亞型抗體（例如IgG和IgM）和不同類型抗體（熒光偶聯(lián)抗體，固定化抗體，不同物種的抗體）的序列分析。
圖3. BTP抗體測序示意圖
技術流程：
1.抗體分離：
從血液或細胞培養(yǎng)中提取抗體。
2.蛋白質消化：
將抗體蛋白質分解成較小的肽段。
3.質譜分析：
使用質譜技術（如串聯(lián)質譜）對這些肽段進行分析，確定它們的質量。
4.氨基酸序列確定：
根據質譜數據，使用生物信息學工具重建氨基酸序列。
百泰派克生物科技抗體測序服務，能夠對抗體全長序列，可變區(qū)氨基酸序列進行分析，為客戶獲取抗體的輕鏈和重鏈的完整序列信息。
抗體全序列分析：優(yōu)化的高分辨率質譜工作流程和一流的抗體從頭測序軟件可確保整個抗體序列從n端到c端進行測序全序列分析；
無與倫比的準確性：序列中每個氨基酸的識別均由多個肽段的多個MS/MS質譜數據中的信號推導得到；
廣泛的適用性：該技術適用于所有抗體類型（IgG、IgA、IgM、IgY、Fab、ScFv等）和物種（人、小鼠、大鼠、兔、倉鼠等）。百泰派克還可以對綴合和污染的蛋白質以及具有兩條不同輕鏈的抗體進行測序。鼠源和人源抗體進行抗體序列分析后，可以保證合成抗體的活性；
高通量：無論您僅要測序一種抗體還是數百種抗體，百泰派克生物科技抗體測序服務均可實現(xiàn)。
通過這些技術，百泰派克生物科技不僅能夠幫助科學家更深入地了解紅斑狼瘡的免疫機制，還能為開發(fā)新的治療方法提供支持。例如，了解特定自身抗體的結構和功能，有助于設計針對性更強、副作用更少的治療藥物。
