BV-2細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題和解決方案

bv-2細胞（貨號ZQ0397）
 

Bv-2細胞培養(yǎng)細節(jié)

培養(yǎng)條件：

MEM（貨號：ZQ-300）+10%FBS（貨號：ZQ0500）+1%P/S（貨號：CSP006）+1%Sodium Pyruvate 100 mM Solution（貨號：CSP003）

中喬培養(yǎng)過程種添加丙酮酸鈉是因為丙酮酸鈉作為細胞能量來源，在細胞培養(yǎng)基中起到替代碳源的作用，參與細胞營養(yǎng)代謝，維持細胞的生長速度和狀態(tài)。
 

丙酮酸鈉（貨號：CSP003）
 

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代步驟：

由于bv-2是半懸浮細胞，因此在如圖所示密度 80%-90%時，即可進行傳代分瓶。

當(dāng)漂浮的懸浮細胞和圓潤細胞比較多時，建議先用吸管輕柔吹打4-6下收集懸浮細胞。當(dāng)漂浮圓潤細胞少時，則棄去培養(yǎng)上清，用PBS輕柔洗細胞1-2次。

加1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后用手掌心拍打瓶尾后，在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。（T25培養(yǎng)瓶建議添加3ml終止液）。

1:3-1:6輕輕打勻后吸出細胞懸液，在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘， 棄去上清液，用手指波動離心管彈松細胞沉淀。

補加1-2ml培養(yǎng)液后進行1:3-1:6分瓶。再添加新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。（t25培養(yǎng)瓶建議添加5-7ml完全培養(yǎng)基。

凍存條件：無血清凍存液（液氮保存）
 

無血清細胞凍存液（貨號：CSP04)
 

Bv-2細胞培養(yǎng)問題

1、生長緩慢：

1.bv-2細胞增值速度很快，倍增時間約為25-35h，當(dāng)發(fā)現(xiàn)生長緩慢時排除污染的可能性，比如真菌污染，細菌污染，支原體污染等因素。

2.適當(dāng)提高一點血清含量，及補充丙酮酸鈉。

2、懸浮細胞變多？

1.Bv-2對培養(yǎng)基酸堿度比較敏感。PH偏堿時候，培養(yǎng)基呈紫紅色。在偏堿培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)小時后將會全部飄起。

2.由于bv-2生長速度快，1：3傳代后，48h后就需要換液，否則細胞密度過大，營養(yǎng)成分減少，容易出現(xiàn)大量細胞漂浮的情況，及時換液即可。

3、細胞容易聚團？

1.BV2是一種半貼壁半懸浮細胞，它的形態(tài)并不規(guī)則，存在圓形和梭形兩種。當(dāng)圓形細胞聚成團塊處于貼壁細胞上和培養(yǎng)基里時，說明細胞處于快速增值分裂的生長狀態(tài)，及時傳代處理即可。

4、貼壁細胞很瘦��？

1.Bv-2細胞出現(xiàn)瘦小、拉絲、不增值等情況時，可能是細胞存在微生物污染，刺激后自行分化、血清營養(yǎng)價值不高，消化傳代過度導(dǎo)致細胞膜損傷等情況導(dǎo)致細胞很瘦小。

2.建議排查污染源，更換血清，分化后的細胞貼壁更牢，極難消化，因此應(yīng)盡量縮短消化時間，預(yù)防細胞分化，重新復(fù)蘇新種子。

5.靜息與激活狀態(tài)下分別是什么樣子？

1.受到刺激的小膠質(zhì)細胞突起縮短變厚，胞體增大，呈現(xiàn)阿米巴樣

2.非激活狀態(tài)有觸角，LPS激活后觸角逐漸消失（激活BV2細胞形態(tài)有點像小眼睛）

3.靜息狀態(tài)下的細胞是成梭形有偽足的，受到刺激的bv-2突起縮短變厚，胞體增大，呈現(xiàn)阿米巴樣。

4.MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基（貨號：ZQ-300）
 

MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基（貨號：ZQ-300)