激光共聚焦顯微鏡之免疫熒光實驗詳細介紹及應用

免疫熒光技術（Immunofluorescence）是一項基于免疫學、生物化學和顯微成像檢測的強大方法，下面對免疫熒光進行詳細介紹。

01 定義與原理

免疫熒光技術，又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發(fā)展最早的一種。其基本原理是利用抗原抗體反應的高度特異性，將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應。

02 直接免疫熒光和間接免疫熒光 

直接免疫熒光：直接免疫熒光的實驗步驟相對簡單。它只需要將特異熒光抗體直接滴加于待檢的標本上，然后熒光標記的抗體與抗原發(fā)生特異結合，使之呈現(xiàn)熒光。這種方法只需要一個標記步驟，因此實驗方案較短。

間接免疫熒光：間接免疫熒光則相對復雜。它需要使用兩個抗體，即一抗和熒光素標記的二抗。首先，將未標記的一抗加到已知抗原標本上，使抗原抗體充分結合。然后洗滌去除未結合的抗體，再加入熒光標記的二抗，二抗與一抗結合，從而間接地標記抗原。這種方法需要額外的操作步驟，特別是在多色實驗中，需要選擇適當的二抗，每個二抗需要靶向不同的物種并偶聯(lián)至不同染料。

圖片改編自：徠卡官網

03 特點

· 特異性強：由于抗原抗體反應具有高度的特異性，因此免疫熒光技術能夠準確識別目標抗原或抗體。
· 敏感性高：熒光色素的標記使得抗原抗體復合物在熒光顯微鏡下易于觀察，從而提高了檢測的敏感性。
· 速度快：免疫熒光技術操作簡便，能夠在短時間內完成檢測。

徠卡激光共聚焦拍攝免疫熒光處理的肝類器官

04 應用范圍

直接免疫熒光：常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。

間接免疫熒光：間接免疫熒光法在基礎生物學、臨床免疫學診斷、生物醫(yī)藥研究、遺傳學等多個領域都有著廣泛的應用，其中在基礎生物學領域可以通過細胞爬片、組織切片、石蠟切片等精確地在細胞或組織中定位和檢測特定的蛋白質。

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