熒光計(jì)的工作原理

熒光計(jì)的作用原理基于熒光染料與特異靶分子結(jié)合的定量分析技術(shù)，其核心優(yōu)勢(shì)在于高特異性和靈敏度。 一、核心工作原理

1. ​熒光染料選擇性結(jié)合
   達(dá)遠(yuǎn)辰光熒光計(jì)使用熒光染料​（如dsDNA HS染料、RNA IQ染料），這些染料僅與目標(biāo)分子（如DNA、RNA、蛋白質(zhì)）特異性結(jié)合，而不會(huì)與雜質(zhì)（如游離核苷酸、鹽離子）反應(yīng)。例如，檢測(cè)雙鏈DNA時(shí)，染料僅與dsDNA結(jié)合，單鏈DNA或RNA不會(huì)產(chǎn)生熒光信號(hào)。
2. ​熒光信號(hào)檢測(cè)與定量
   激發(fā)光源（如LED）發(fā)出特定波長(zhǎng)光（如502 nm激發(fā)dsDNA染料），激發(fā)結(jié)合了染料的靶分子發(fā)出熒光（如532 nm發(fā)射光）。檢測(cè)器通過(guò)濾光片分離熒光信號(hào)，避免瑞利散射光干擾，最終將信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)并輸出定量結(jié)果。
3. ​低濃度靈敏度
   達(dá)遠(yuǎn)辰光的熒光計(jì)的檢測(cè)下限可達(dá)0.01 ng/μL DNA或0.02 ng/μL蛋白質(zhì)，遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)紫外吸光法（如Nanodrop的最低檢測(cè)限為2 ng/μL DNA）。例如，使用賽默飛Qubit dsDNA HS試劑盒可檢測(cè)0.2–100 ng/μL范圍的DNA。

二、與傳統(tǒng)紫外法的對(duì)比

​特性	​Qubit熒光計(jì)	​紫外吸光法（如Nanodrop）​
​選擇性	僅檢測(cè)靶分子，排除污染物干擾	測(cè)量所有分子在260 nm處的吸光度
​靈敏度	可檢測(cè)微量樣品（1 μL起）	需至少1–2 μL樣品，靈敏度較低
​準(zhǔn)確性	誤差范圍更�。–V值<5%）	受污染物影響，結(jié)果偏高
​適用場(chǎng)景	低濃度/珍貴樣品（如NGS文庫(kù)、降解RNA）	快速篩查污染物或高濃度樣品

三、關(guān)鍵應(yīng)用場(chǎng)景

1. ​核酸定量與純度評(píng)估
   • 區(qū)分dsDNA與ssDNA/RNA（如搭配賽默飛Qubit dsDNA HS試劑盒）。
   • 評(píng)估RNA完整性（如搭配賽默飛Qubit RNA IQ試劑盒，通過(guò)雙染料檢測(cè)完整RNA與降解RNA）。
2. ​蛋白質(zhì)定量
   • 兼容含去污劑的樣品（如搭配賽默飛Qubit Protein Assay試劑盒可耐受微量SDS）。
   • 測(cè)量范圍覆蓋12.5–20,000 μg/mL。
3. ​下游實(shí)驗(yàn)支持
   • qPCR、NGS文庫(kù)構(gòu)建前精確配樣。
   • 藥物研發(fā)中評(píng)估小分子化合物濃度。

四、典型誤差來(lái)源與注意事項(xiàng)

• ​溫度影響：檢測(cè)管在儀器內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間停留可能導(dǎo)致溫度升高，需取出靜置后復(fù)測(cè)。
• ​試劑兼容性：不同染料對(duì)應(yīng)特定靶分子，需嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明操作。

​數(shù)據(jù)時(shí)效性：預(yù)混樣品需在3小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，避免熒光信號(hào)衰減