利用液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)量瞬時(shí)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度

摘要：通過(guò)加工一個(gè)帶有注射孔的測(cè)量室頂部鉛蓋，蔣自動(dòng)液體閃爍計(jì)數(shù)器改裝成一種發(fā)光分析儀改裝后的液體閃爍計(jì)數(shù)器既能測(cè)量發(fā)光強(qiáng)度，又能測(cè)量射線，且測(cè)量目射線性能不變。發(fā)光強(qiáng)度的測(cè)量性能與專(zhuān)用發(fā)光分析儀具有良好的相關(guān)性，且靈敏度高于專(zhuān)用發(fā)光分析儀。

 

關(guān)鍵詞：發(fā)光分析儀；液體閃爍計(jì)數(shù)器

 

目前，發(fā)光分析技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用，各種專(zhuān)用發(fā)光分析儀也相繼問(wèn)世，但價(jià)格較貴。用于口射線測(cè)量的液體閃爍計(jì)數(shù)器，實(shí)際上是測(cè)量射線作用下閃爍體的發(fā)光，這種發(fā)光是一種穩(wěn)定的，而且是多光子的事件]。生物化學(xué)發(fā)光一般為瞬時(shí)的，且為單光子事件，它的發(fā)光值在反應(yīng)物相互接觸的瞬時(shí)達(dá)到最大，然后迅速下降。因此，直接利用液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)量生物化學(xué)發(fā)光受到了限制。

我們對(duì)液體閃爍計(jì)數(shù)器的測(cè)量室進(jìn)行了改裝．改裝的液體閃爍計(jì)數(shù)器能與專(zhuān)用的發(fā)光分析儀一樣方便地加樣，解決了液體閃爍計(jì)數(shù)器不能及時(shí)加樣及時(shí)測(cè)量的問(wèn)題，進(jìn)而用于生物化學(xué)發(fā)光的測(cè)量。

 

將FJ一2115自動(dòng)液體閃爍計(jì)數(shù)器(西安262廠生產(chǎn))頂蓋打開(kāi)，移去測(cè)量室頂都鉛蓋，裝上專(zhuān)門(mén)加工的帶有注射小孔的鉛蓋，并加用黑色橡皮墊圈，以避免光線透入。選擇相加測(cè)量方式，利用熒光素酶ATP發(fā)光體系對(duì)改裝的裝置進(jìn)行測(cè)試：①用NaOH一甘氨酸緩沖液將熒光素酶(中科院上海植物生理研究所)配制成3．5mg／ml的濃度②將ATP標(biāo)準(zhǔn)(德國(guó)B．M公司)用Tris—HC1緩沖液稀釋成1×10 ^-8mol／L，l×10 mol／I，……1×10 ^-11mol／L的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度。③分別取各標(biāo)準(zhǔn)液200uL加入發(fā)光管中。④將發(fā)光管送人測(cè)量室后．從注射孔注入800 uL熒光素酶溶液，測(cè)6s的發(fā)光值N。

 

2．1發(fā)光測(cè)量

將各標(biāo)準(zhǔn)液的6s發(fā)光值Ni減去本底值No，并取對(duì)數(shù)得：Yi=lg(Ni-No)，將濃度c取對(duì)數(shù)得：Xi=lgCi，以Yi為縱坐標(biāo)，Xi為橫坐標(biāo)作圖(圖1)。

 

FJ一2115的測(cè)量結(jié)果與LKB一1251(瑞典LKB公司生產(chǎn)的發(fā)光分析儀)的測(cè)量結(jié)果具有良好的相關(guān)性(r=098)，且FJ一2115的靈敏度略高于LKB1251。

2．2穩(wěn)定性

對(duì)同一濃度的ATP分別用IKB1251和改裝的FJ一2ll5液體閃爍計(jì)數(shù)器重復(fù)測(cè)量20次，其誤差分別為7．8和8．1，兩者結(jié)果相近．無(wú)顯著性差異。

2．3改裝的FJ一2115對(duì)B射線謝量的影響

改裝前。H的測(cè)量效率為51．2%．本底為15CPM，品質(zhì)因素為58.25改裝后H的測(cè)量效率為51．1，本底為48CPM，品質(zhì)因素為54.4。

 

 

液體閃爍計(jì)數(shù)器是用來(lái)測(cè)量p射線的專(zhuān)用儀器，有兩個(gè)光電倍增管，采用符合測(cè)量方式(即兩個(gè)光電管同時(shí)有信號(hào)時(shí)才給出信號(hào)．否則無(wú)信號(hào)輸出)。如果用它來(lái)測(cè)量諸如生物化學(xué)發(fā)光之類(lèi)的單光子事件時(shí)，則需采用相加測(cè)量方式，這樣，其測(cè)量效率就比單光電倍增管的專(zhuān)用發(fā)光分析儀要提高一些，同時(shí)噪聲信號(hào)也會(huì)有所增加。本研究將自動(dòng)液體閃爍計(jì)數(shù)器改裝成能及時(shí)加樣及時(shí)測(cè)量的發(fā)光分析儀，其測(cè)量性能與專(zhuān)用發(fā)光分析儀相近，有些指標(biāo)還要好于專(zhuān)用發(fā)光分析儀。發(fā)揮了一機(jī)多能的作用，在不增加投資的條件下，為擁有液體閃爍計(jì)數(shù)

器的單位開(kāi)展化學(xué)發(fā)光分析研究提供了方便。改裝后的液體閃爍計(jì)數(shù)器同樣可以測(cè)量p射線。

(來(lái)源：華中科技大學(xué)學(xué)報(bào) 舒柏華 張利平 徐順清）