石蠟切片的制備指南（下）

瀏覽次數(shù)：7312　發(fā)布日期：2018-1-5　來(lái)源：徠卡

前言

制備高質(zhì)量的病理切片需要一定的技巧和經(jīng)驗(yàn)—但我們都須從頭開(kāi)始學(xué)習(xí)。

該教程的目的是協(xié)助初學(xué)者熟悉石蠟切片的制備，以及作為經(jīng)驗(yàn)更豐富的技術(shù)專(zhuān)家的進(jìn)修課程。涵蓋輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)制備石蠟切片的設(shè)置和操作相關(guān)的基本內(nèi)容。同時(shí)對(duì)切片過(guò)程中的部分常見(jiàn)故障進(jìn)行具體說(shuō)明，并提供故障排除建議。

13學(xué)習(xí)厚薄一致、高質(zhì)量、薄切片的切片技術(shù)

不存在任何替代性經(jīng)驗(yàn),但有一些基本步驟可使此項(xiàng)任務(wù)更為簡(jiǎn)單。

采用未用過(guò)的刀片部分進(jìn)行粗修。
當(dāng)使用粗進(jìn)刀時(shí),避免意外切割較厚的切片,因?yàn)檫@可能損壞刀片或蠟塊表面。
如果蠟塊表面溫度升高或者需要更深層次的冷卻,則可能需要對(duì)蠟塊進(jìn)行再冷卻。
通常情況下,緩慢、均勻的切割沖程可得到最好的結(jié)果和最小的壓縮。
在切割沖程期間切勿停止并重啟,因?yàn)檫@將導(dǎo)致同一張切片的厚度不均。
一些實(shí)驗(yàn)室的常見(jiàn)做法是在切割每張切片之前立即對(duì)冷凍蠟塊的表面輕輕吹氣。采用溫暖潮濕的氣息會(huì)使切片的粘性增強(qiáng),但該方法同樣可導(dǎo)致熱膨脹,從而使切片厚度增加。
蠟塊上部或下部邊緣或刀片背面存在的碎片可導(dǎo)致難以獲得具有粘性的條帶,從而導(dǎo)致條帶在上行沖程過(guò)程中與刀片之間存在提離距離。如果存在碎片,請(qǐng)立即清除,并重新冷卻蠟塊,然后重新開(kāi)始切片。

該條帶釆用緩慢而穩(wěn)定的沖程對(duì)經(jīng)過(guò)良好處理且徹底冷卻的蠟塊進(jìn)行切割而得。即使在浮選之前,該切片亦顯示出較小的壓縮。

14正確選擇載玻片和膠粘劑

隨后要釆用的染色方法將影響載玻片和膠粘劑的選擇。

載玻片必須無(wú)油脂和灰塵,并正確地進(jìn)行存儲(chǔ)和處理。
如果染色包括抗原修復(fù)(IHC)、酶預(yù)處理(ISH)或長(zhǎng)時(shí)間孵化步驟,必須使用帶電荷的載玻片或使用膠黏劑,如胺基烷基硅烷(AAS)。一些特殊染色,特別是使用堿性染色劑時(shí),也可能會(huì)導(dǎo)致切片浮起。
載玻片必須根據(jù)當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)釆用準(zhǔn)確且適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行標(biāo)記。

15 仔細(xì)漂片

漂片應(yīng)該將切片展開(kāi)至其原始尺寸,并確保其完全平坦。

小心監(jiān)控溫度,溫度需要低于蠟的熔點(diǎn)(5-9℃)。
確保水源干凈,且不存在氣泡和切片浪費(fèi)(避免交叉污染)。
將切片的光滑(光澤)面向下放置。
溫和的表面張力作用將切片置于水面。
當(dāng)刷子或鉗子撞出波紋或氣泡時(shí),切片很容易損壞。
對(duì)每個(gè)切片進(jìn)行檢查,因?yàn)楫?dāng)其漂浮在水面上時(shí),很容易觀察到其表面所存在的缺陷。
使切片離開(kāi)水面,且持續(xù)足夠長(zhǎng)的時(shí)間,從而壓平切片。過(guò)度擴(kuò)張可能破壞敏感部分的形態(tài)。
為促進(jìn)有效引流并防止切片在載玻片上滑動(dòng),從水中移出載玻片時(shí)應(yīng)保持垂直方向。
將載玻片置入切片干燥器或烤箱之前,請(qǐng)將切片短暫地垂直放置以去除多余的水分。
在各蠟塊之間,采用無(wú)棉纖維織物對(duì)水面進(jìn)行脫脂,以避免交叉污染的可能性。
為避免出現(xiàn)混合浮選,一次浮選僅針對(duì)同一蠟塊的切片。

源自?xún)蓚€(gè)蠟塊的切片絕對(duì)不能同時(shí)進(jìn)行漂片。因?yàn)椴煌?lèi)型樣本,有可能出現(xiàn)交叉污染和混淆,從而導(dǎo)致診斷不準(zhǔn)確。因此,在任何時(shí)候均應(yīng)避免該情況。

16充分干燥載玻片

正確干燥可確保切片完全脫水且不會(huì)導(dǎo)致熱損傷,平整且不太可能在染色過(guò)程中翹起。

在干燥之前,通過(guò)將切片垂直排出多余的水分。如果載玻片在熱平板上進(jìn)行干燥,該操作將非常重要。
載玻片可以垂直放置于架子上,然后在烤箱中進(jìn)行干燥。
通常情況下,干燥溫度不應(yīng)超過(guò)65°C。
過(guò)熱會(huì)導(dǎo)致切片下方的水滴沸騰,從而導(dǎo)致?lián)p壞。
切片干燥應(yīng)持續(xù)10到30分鐘。
對(duì)于一些脆弱的標(biāo)本,在37°C條件下進(jìn)行較長(zhǎng)時(shí)間(幾小時(shí)到一整夜)的干燥可能會(huì)得到更好的結(jié)果。

17徹底清潔和維護(hù)切片機(jī)

使用后清除累積的組織和石蠟碎片將非常重要,定期預(yù)防性維護(hù)亦非常重要。

每天對(duì)儀器進(jìn)行清潔。
在清潔之前,切記取下刀片。
持刀架可以很容易地移除,從而方便清潔。
最好采用干燥毛筆清除切片所產(chǎn)生的垃圾。
切勿使用酒精或二甲苯清洗外表面,因?yàn)閮x器不耐受這些溶劑,應(yīng)避免暴露于二甲苯。推薦采用清蠟劑、溫和的市售家用清潔劑或肥皂水。
清潔期間必須確保沒(méi)有液體進(jìn)入儀器內(nèi)部。
由合格的服務(wù)人員對(duì)儀器進(jìn)行檢查,至少每年一次。
遵循說(shuō)明書(shū)提供的潤(rùn)滑說(shuō)明,使用推薦的潤(rùn)滑油。

18學(xué)會(huì)識(shí)別和糾正常見(jiàn)錯(cuò)誤

石蠟切片過(guò)程中的部分最常見(jiàn)錯(cuò)誤

測(cè)微計(jì)設(shè)置錯(cuò)誤
將溫暖的呼吸氣體應(yīng)用于冷卻的蠟塊,以便于切片
選定條帶的首次切片
切片速度太快
處理不足
切片機(jī)需要重新校準(zhǔn)