藥物分析技術(shù)之DNA擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用

在藥物的分析和研究，以及控制藥物質(zhì)量等方面有著廣泛應(yīng)用的藥物分析檢測(cè)技術(shù)，可以采用物理、化學(xué)等方式對(duì)藥物進(jìn)行系統(tǒng)的分析，并結(jié)合現(xiàn)代化學(xué)、光譜、色譜等技術(shù)對(duì)藥品進(jìn)行研究。DNA擴(kuò)增檢測(cè)技是現(xiàn)代生物學(xué)重大發(fā)現(xiàn)之一，也是現(xiàn)代藥物分析中快速檢測(cè)技術(shù)之一。

作為人體生命的重要物質(zhì)，核酸和蛋白的異常表達(dá)往往與癌癥疾病息息相關(guān)，及早發(fā)現(xiàn)、診斷和治療會(huì)有效降低癌癥的發(fā)病率，因此迫切需要建立能檢測(cè)痕量核酸和蛋白的高靈敏策略。核酸大分子分為兩類(lèi)：脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)，它們是生物的基本遺傳物質(zhì)。DNA、RNA(尤其miRNA)的表達(dá)水平與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，如腫瘤的發(fā)生、病毒的感染等。

DNA擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用主要是通過(guò)DNA片段的擴(kuò)增識(shí)別，將傳統(tǒng)需要較長(zhǎng)時(shí)間才可以肉眼識(shí)別的過(guò)程，實(shí)現(xiàn)快速的分析得出結(jié)論。DNA擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)首先變現(xiàn)模板DNA，其次將引物與模板DNA進(jìn)行復(fù)合。然后延伸引物，并通過(guò)引物的作用，形成半保留DNA。DNA擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)并不需要將樣品與病毒進(jìn)行分離，大大簡(jiǎn)化了模板的獲得流程，其操作模式也較為簡(jiǎn)單。DNA擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)是一種重要藥物分析檢測(cè)技術(shù)之一，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)技術(shù)是DNA擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)主要應(yīng)用平臺(tái)。

PCR的最大特點(diǎn)，是能將微量的DNA大幅增加。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)用于藥物分析檢測(cè)，通過(guò)對(duì)藥物的序列進(jìn)行擴(kuò)增，可以進(jìn)行藥物的鑒別研究。如有研究者通過(guò)對(duì)市面大量流通的非中國(guó)藥典收載紫草基原的所謂紫草進(jìn)行分析，建立紫草正品與非中國(guó)藥典品的鑒別方法[1]。研究者通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)紫草的ITS2序列進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)與Gen Bank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Blast比對(duì)，確定非中國(guó)藥典品的科屬；利用距離法和建樹(shù)法比較非中國(guó)藥典品與軟紫草屬、滇紫草屬、紫草屬的親緣關(guān)系；利用限制性?xún)?nèi)切酶AluⅠ酶切PCR產(chǎn)物，將酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后紫外成像。結(jié)果發(fā)現(xiàn)利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)限制性長(zhǎng)度片段多態(tài)性法可鑒別紫草正品與非中國(guó)藥典品。

藥物分析不僅是對(duì)化學(xué)成分、中藥性質(zhì)的靜態(tài)研究，還是對(duì)生物體內(nèi)的代謝以及反映動(dòng)態(tài)進(jìn)行分析的過(guò)程，藥物分析是以物質(zhì)科學(xué)為基礎(chǔ)與生命科學(xué)相結(jié)合發(fā)展，演變成對(duì)藥物活性的相關(guān)分析。美迪西藥物分析提供全方位的藥物分析服務(wù)，包括方法開(kāi)發(fā)和方法驗(yàn)證，分析測(cè)試與放行，穩(wěn)定性研究，大規(guī)模分離和CMC申報(bào)文件服務(wù)。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)還能夠?qū)�基因鑒定起到一定的積極作用，通過(guò)PCR檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用，逐一診斷人體內(nèi)的DNA，有助于盡早判定缺陷DNA，能夠及時(shí)預(yù)知疾病，有助于該疾病的預(yù)防以及治療方案制定。如有研究者建立了檢測(cè)鼠類(lèi)肉瘤濾過(guò)性毒菌致癌同源體B1(BRAF)基因V600E突變的熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法，為黑色素瘤的藥物靶向治療提供新的基因檢測(cè)方法[2]。方法是根據(jù)BRAF基因序列V600E位點(diǎn)區(qū)域設(shè)計(jì)特異性的引物和探針，建立該檢測(cè)方法。檢測(cè)BRAF基因V600E突變的黑色素瘤臨床樣本、BRAF基因V600E突變質(zhì)粒和正常臨床樣本，評(píng)價(jià)方法的準(zhǔn)確性、靈敏度和特異性。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)BRAF基因V600E突變的黑色素瘤臨床樣本在V600E檢測(cè)體系中具有特異性的擴(kuò)增；檢測(cè)靈敏度約為101拷貝/反應(yīng)；正常臨床樣本在V600E檢測(cè)體系中沒(méi)有特異性的擴(kuò)增，均是V600E突變陰性。該研究建立的方法可以用于檢測(cè)黑色素瘤臨床樣本中的BRAF基因V600E突變。

在醫(yī)療事業(yè)發(fā)展的過(guò)程中，該技術(shù)的應(yīng)用范圍極廣，PCR檢測(cè)技術(shù)還能夠?qū)�疾病診斷起到重要的作用，可以快速分離并檢測(cè)出DNA片段中所含有的細(xì)菌以及病毒等常見(jiàn)病原體，能夠?qū)σ恍┎《拘粤鞲幸约澳[瘤等疾病起到一定的病情判斷作用。

[1]基于ITS2序列的紫草PCR-RFLP鑒別研究[J].

[2]BRAF基因V600E突變檢測(cè)的熒光PCR方法的建立[J].