評(píng)價(jià)疫苗有效性的金標(biāo)準(zhǔn)-T細(xì)胞和B細(xì)胞ELISPOT技術(shù)

 

事實(shí)：能使人生病的細(xì)菌、病毒等病原體幾乎無(wú)處不在，我們的身體無(wú)時(shí)無(wú)刻不處在病原體的包圍之中，但是通常情況下，我們并沒(méi)有感到不適。這是因?yàn)槲覀冇兄鴱?qiáng)大的免疫系統(tǒng)。

 

人體的免疫系統(tǒng)是一個(gè)復(fù)雜又神奇的存在，既能幫助人體有效抵御病原體的侵害，又能維持平衡不攻擊正常的人體細(xì)胞，人體免疫包括非特異性免疫和特異性免疫，其中特異性免疫簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)又分為體液免疫（B 細(xì)胞主導(dǎo)，通過(guò)分泌抗體來(lái)起作用）和細(xì)胞免疫（T細(xì)胞主導(dǎo)，通過(guò)分泌細(xì)胞因子來(lái)起作用）。在免疫反應(yīng)中，CD4+T細(xì)胞具有激活B細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的功能，B細(xì)胞主要產(chǎn)生中和抗體，而CD8+T細(xì)胞主要在細(xì)胞免疫中通過(guò)分泌細(xì)胞因子來(lái)起作用，并產(chǎn)生記憶B細(xì)胞和記憶T細(xì)胞。機(jī)體產(chǎn)生的中和抗體主要抑制病毒的進(jìn)一步感染，細(xì)胞免疫則主要對(duì)抗臨床癥狀。

 

疫苗即是通過(guò)誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫達(dá)到預(yù)防相應(yīng)傳染病的目的。因此，中和抗體和細(xì)胞免疫也是病毒疫苗有效性評(píng)價(jià)中非常重要的指標(biāo)。那么哪種方法可以評(píng)估疫苗引起的體液免疫和細(xì)胞免疫呢？ELISPOT可以給你答案：

 

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)（Enzyme-linked Immunospot Assay，ELISPOT）是將細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和ELISA技術(shù)相結(jié)合，可以原位地檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞體外分泌蛋白的高靈敏分析技術(shù)。根據(jù)技術(shù)原理，主要分為T(mén)細(xì)胞與B細(xì)胞ELISpot兩種。其中T細(xì)胞ELISpot主要用于檢測(cè)刺激后細(xì)胞所分泌的痕量細(xì)胞因子，而B(niǎo)細(xì)胞ELISpot主要用于檢測(cè)抗體分泌B細(xì)胞的頻率。

 

 

A：將特異性抗原包被在培養(yǎng)孔底部捕獲IgG，用生物素偶聯(lián)的抗體進(jìn)行檢測(cè)；

B：使用抗IgG的抗體進(jìn)行包被，用生物素偶聯(lián)的抗原進(jìn)行檢測(cè)；

C：總的IgG的檢測(cè)方法：使用抗IgG的抗體進(jìn)行包被，再使用生物素偶聯(lián)的抗體進(jìn)行檢測(cè)。

 

B細(xì)胞ELISpot用于研究抗體分泌細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)，主要包括感染后以及疫苗接種后應(yīng)答反應(yīng)的研究。目前，B細(xì)胞ELISpot是僅有幾個(gè)能夠直接關(guān)注抗體分泌細(xì)胞（ASCs）的檢測(cè)工具之一，而其他的分析方法多為檢測(cè)液體中游離的抗體。相比于其他檢測(cè)方法，研究人員借助B細(xì)胞ELISpot可以更準(zhǔn)確地識(shí)別出樣本中的ASCs，并測(cè)定出其數(shù)量及針對(duì)特異性抗原分泌的抗體數(shù)量。

 

T細(xì)胞的ELISpot

 

將特定指標(biāo)的抗體包被在培養(yǎng)孔底部捕獲對(duì)應(yīng)細(xì)胞因子，用生物素偶聯(lián)的抗體進(jìn)行檢測(cè)

 

T細(xì)胞ELISpot廣泛應(yīng)用于細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答研究，如傳染性疾病，癌癥，過(guò)敏癥以及自身免疫性疾病的研究中，并且T細(xì)胞ELISpot也被視為為檢測(cè)和評(píng)價(jià)疫苗 有利的研究工具之一。在疫苗治療前后，如何準(zhǔn)確的定性，定量判斷抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)，評(píng)價(jià)療效是疫苗發(fā)展的關(guān)鍵。例如，Th1細(xì)胞主要分泌IFN-γ，IL-2和TNF-α，Th2細(xì)胞主要分泌IL-4，IL-5以及IL-13。借助ELISpot測(cè)定疫苗治療前后T細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞因子表達(dá)量變化來(lái)進(jìn)行疫苗評(píng)價(jià)。

 

 

ELISPOT技術(shù)優(yōu)勢(shì)

 

① 靈敏度高。在一百萬(wàn)個(gè)陰性細(xì)胞中只要有一個(gè)分泌細(xì)胞因子的陽(yáng)性細(xì)胞即可被檢測(cè)出來(lái)。這是目前為止，最為靈敏的檢測(cè)技術(shù)，靈敏度比傳統(tǒng)的ELISA方法高2-3個(gè)數(shù)量級(jí)。

② 單細(xì)胞水平。ELISpot檢測(cè)的是單個(gè)細(xì)胞分泌，而非細(xì)胞群體的平均分泌。

③ 功能學(xué)檢測(cè)。ELISpot檢測(cè)到的細(xì)胞因子不是在細(xì)胞正常狀態(tài)下就存在的，而是在檢測(cè)的過(guò)程中活細(xì)胞收到刺激物的刺激后分泌出來(lái)的。斑點(diǎn)的強(qiáng)弱和數(shù)量直接反映了細(xì)胞對(duì)刺激物的反應(yīng)能力和分泌細(xì)胞因子的能力。

④ 直觀、可信度高。結(jié)果直觀，一個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞對(duì)應(yīng)一個(gè)斑點(diǎn)。

 

Mabtech公司提供的B細(xì)胞ELISpot檢測(cè)指標(biāo)包括人，非人靈長(zhǎng)類(lèi)，小鼠，牛、豬等種屬的IgG，IgA，IgM以及IgE，下表僅列出人的做為參考，其他種屬的B細(xì)胞ELISpot檢測(cè)指標(biāo)，詳詢艾美捷科技。

 

 

當(dāng)然， Mabtech作為ELISpot、FluoroSpot和ELISA等免疫學(xué)相關(guān)研究的領(lǐng)導(dǎo)者，除了可以提供以上B細(xì)胞ELISpot檢測(cè)指標(biāo)，還可提供最全的T細(xì)胞ELISpot檢測(cè)指標(biāo): 白細(xì)胞介素IL（扒一扒白細(xì)胞介素（Interleukin）的家族秘密）、腫瘤壞死因子TNF（Mabtech腫瘤壞死因子-α的產(chǎn)品大集合啦）、干擾素IFN（IFN-γ ELISpot法：有效評(píng)估疫苗引起的細(xì)胞免疫效應(yīng)）等，更多細(xì)胞因子的ELISpot檢測(cè)指標(biāo)，詳詢艾美捷科技。

 

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