全自動毛細管Western技術(shù)在T細胞外泌體遞送VEGF抗體治療的應(yīng)用

 

研究背景
年齡相關(guān)性黃斑變性和糖尿病性視網(wǎng)膜病變誘發(fā)的新生血管的形成是導致失明的兩個主要原因，通常的治療方案是使用靶向血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的抗體（anti-VEGF antibodies (aV)）進行治療。盡管治療的早期階段aV具有更高的有效性，但仍有50%–67.4%的aV治療的老年性黃斑變性患者，在治療2年后有視力恢復不佳等情況發(fā)生。在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的患者中，對aV治療的抵抗率（持續(xù)性黃斑增厚）也約為40%。這意味著aV在眼部新生血管病變中的藥效不是很理想，或者還有其它致病因素如炎癥等因素需要考量。

有研究報道，與接受白內(nèi)障手術(shù)的沒有其它眼部病變的患者相比，脈絡(luò)膜新生血管(CNV)或視網(wǎng)膜新生血管（RNV）的患者的房水中炎性細胞因子水平升高，且這些炎癥標志物與眼部新生血管疾病中VEGF產(chǎn)生的增加呈正相關(guān)。因而，炎癥不一定是新血管形成的結(jié)果，也有可能是驅(qū)動眼部新生血管形成的主要致病因素之一。而原有使用激素療法來抗炎的案例又有不良反應(yīng)發(fā)生，因此急需一種新型的聯(lián)合給藥方式（抗VEGF+抗炎）出現(xiàn)。

研究內(nèi)容
中國科學院過程工程研究所生化工程國家重點實驗室與北京朝陽醫(yī)院等地的科學家，基于VEGF和炎癥的協(xié)同活性促進眼部新生血管形成的機制，開發(fā)了一種針對抗VEGF和抗炎癥的聯(lián)合療法。利用體內(nèi)具有天然抗炎活性的Treg來源的外泌體（rEXS）為載體，通過基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）敏感肽段（cL）連接VEGF抗體（aV），創(chuàng)建了rEXS-cL-aV體系。當玻璃體腔注射后，利用rEXS向炎癥部位的趨化性，攜帶aV富集于眼底新生血管病灶，隨后利用病灶部位高表達的MMP酶解敏感肽段cL并釋放aV。在上述時空耦合遞送的基礎(chǔ)上，分別利用rEXS的抑制炎癥作用和aV的抑制血管生成作用實現(xiàn)協(xié)同增效。

全自動毛細管Western技術(shù)鑒定調(diào)節(jié)性T細胞外泌體VEGF抗體遞送系統(tǒng)（rEXS-cL-aV）

CD9, CD47, ALIX, TSG101: 外泌體marker（鑒定外泌體）

CCR6：趨化因子受體（通過炎癥趨化因子的梯度增強納米藥物在新生血管病變中的積累）

IL-10，CTLA-4：Treg免疫抑制蛋白（鑒定此外泌體是Treg來源）

aV：VEGF（鑒定遞送藥物VEGF抗體）

β-Tubulin：內(nèi)參（蛋白定量歸一化）

此研究中鑒定調(diào)節(jié)性T細胞外泌體VEGF抗體遞送系統(tǒng)（rEXS-cL-aV），利用了全自動毛細管Western技術(shù)。因常規(guī)制備方法獲取外泌體樣本效率不高，因此用傳統(tǒng)Western技術(shù)會常常面臨樣本量不足，無蛋白表達的困境。全自動毛細管Western技術(shù)，只需3μL樣本，不到3小時直接獲得24個樣本定量結(jié)果。且此過程除手動加樣+試劑后，無需任何手動操作，數(shù)據(jù)穩(wěn)定重現(xiàn)性佳，是微量或珍稀樣本蛋白定量的不二之選。