排查MiSeq的Best Focus和No Usable Signal及其它第一個(gè)循環(huán)報(bào)錯(cuò)原因

MiSeq™平臺(tái)在第一個(gè)循環(huán)拍照時(shí)發(fā)生報(bào)錯(cuò)通常表明簇信號(hào)強(qiáng)度不夠，儀器不能找到最佳的聚焦平面。

可能的報(bào)錯(cuò)信息包括：
· Best focus not found
· Best focus is too near the edge of range
· No usable signal found, it is possible clustering has failed
· Through-focus peak did not exceed SNR threshold
· Z Motor attempt to move outside soft limits

可能的儀器原因包括：
· 參與簇生成和第一個(gè)堿基化學(xué)反應(yīng)試劑的液流問題
· 流動(dòng)槽溫控問題
· 光學(xué)系統(tǒng)問題（這種情況非常少）

可能的文庫(kù)和試劑原因包括：
· 使用了過期或者儲(chǔ)存條件不當(dāng)?shù)脑噭?br /> · 文庫(kù)設(shè)計(jì)或者文庫(kù)質(zhì)量/定量問題
· 由于文庫(kù)設(shè)計(jì)問題導(dǎo)致Read1引物雜交不好
· 使用了不合適的引物
· 簇密度過高或者過低

如果已明確是引物問題，而且機(jī)器可以聯(lián)網(wǎng)，請(qǐng)直接和Techsupport聯(lián)系或通過因美納服務(wù)與支持公眾號(hào)提交需求進(jìn)行問題排查。

排查第一個(gè)循環(huán)報(bào)錯(cuò)原因
首先可以按照MiSeq™ System Guide對(duì)儀器進(jìn)行系統(tǒng)檢查，確保儀器的流路、溫度以及機(jī)械移動(dòng)系統(tǒng)正常運(yùn)行：

1. 對(duì)儀器進(jìn)行Post Run Wash（測(cè)序后清洗）
2. 按照使用手冊(cè)，重啟機(jī)器
3. 去Manage Instrument（管理儀器）界面，點(diǎn)擊System Check（系統(tǒng)檢查）
4. 選擇所有的機(jī)械移動(dòng)系統(tǒng)測(cè)試，潤(rùn)洗試劑流路，溫度梯度以及流路測(cè)試

當(dāng)系統(tǒng)檢查完成，點(diǎn)擊屏幕左下方的Show Details（展開細(xì)節(jié)）按鈕，得到檢查結(jié)果的完整信息。如果是PR2以外的任何流路測(cè)試或者其它測(cè)試失敗，請(qǐng)發(fā)郵件到chinasupport@illumina.com或通過因美納服務(wù)與支持公眾號(hào)獲得更多技術(shù)支持。
 

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僅供研究使用，不得用于診斷