傳統(tǒng)手工制膠與預(yù)制膠的區(qū)別

SDS電泳技術(shù)首先在1967年由Shapiro建立，1969年由Weber和Osborne進(jìn)一步完善。SDS電泳技術(shù)是在變性條件下使用陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉（SDS）。SDS通過(guò)包裹蛋白質(zhì)來(lái)變性和展開(kāi)蛋白質(zhì)疏水部分。SDS以一定的比例結(jié)合蛋白質(zhì)，形成的SDS-蛋白復(fù)合物是高度負(fù)電荷的，在電泳中此類(lèi)復(fù)合物可依據(jù)其分子量大小分離它們。

 

聚丙烯酰胺和瓊脂糖是兩種常用于電泳的支持基質(zhì)，支持基質(zhì)為多孔介質(zhì)，其行為類(lèi)似于分子篩。分子的分離取決于凝膠的孔徑及使用的支持基質(zhì)。瓊脂糖具有較大的孔徑和非常適合分離大分子，如核酸和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)復(fù)合物。聚丙烯酰胺具有較小的孔徑和非常適合分離大多數(shù)蛋白質(zhì)和較小的核酸。

電泳的緩沖系統(tǒng)是用連續(xù)或不連續(xù)的方法進(jìn)行的。連續(xù)緩沖系統(tǒng)只使用一種凝膠緩沖液和運(yùn)行緩沖液。不連續(xù)的緩沖器系統(tǒng)使用不同的凝膠緩沖液和運(yùn)行緩沖液。這個(gè)系統(tǒng)也可以使用兩個(gè)不同孔徑和濃度的凝膠層以及不同的緩沖液組成（堆積膠，分離膠）。使用不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳可達(dá)到更高的分辨率。

含有單一濃度的聚丙烯酰胺凝膠稱(chēng)為固定濃度凝膠，聚丙烯酰胺凝膠濃度呈梯度范圍的凝膠被稱(chēng)為梯度凝膠。使用梯度凝膠的優(yōu)點(diǎn)首先是它可以分離比固定濃度凝膠分離范圍更廣的蛋白質(zhì)，其次是它在轉(zhuǎn)印方面有優(yōu)勢(shì)，它可以將分子量更大的蛋白分離在相對(duì)濃度較低的梯段，從而增加轉(zhuǎn)印效率。

最初的SDS聚丙烯凝膠是管狀的

Bio-rad公司的Mini手工聚丙烯酰胺凝膠灌制系統(tǒng)

通常Mini型手工聚丙烯酰胺凝膠在約8 cm X 10 cm的兩塊有支持物固定的玻璃板中灌制，玻璃板一塊厚一塊薄，合并厚度約為4 mm，凝膠凝固后可以直接放置于電泳槽中運(yùn)行。在灌制時(shí)通常使用6%-20%的固定濃度分離膠及4%的固定濃度濃縮膠。最常用的凝膠緩沖系統(tǒng)為L(zhǎng)aemmli系統(tǒng)，其膠內(nèi)緩沖體系為T(mén)ris-Cl體系，分離膠的PH值約為8.8，濃縮膠的PH值約為6.8，其電泳運(yùn)行緩沖體系為T(mén)ris-glycine體系，PH值約為8.3，為典型的不連續(xù)緩沖體系。其作為蛋白分離的經(jīng)典方法已使用多年，但是由于其局限性，它有如下不足。

首先其分離膠的PH值為8.8，堿性條件，致使其保質(zhì)期不會(huì)超過(guò)1個(gè)月。長(zhǎng)時(shí)間放置丙烯酰胺會(huì)緩慢水解，導(dǎo)致分離介質(zhì)變質(zhì)，分離效果下降。此類(lèi)凝膠只能短時(shí)間放置，現(xiàn)配現(xiàn)用為最佳。

其次丙烯酰胺為神經(jīng)毒性物質(zhì)，雖然市場(chǎng)上通常以膠液形式出售，相較于粉狀固體其配制時(shí)接觸程度降低，但依然需要防護(hù)措施，特別是不慎滴于皮膚上時(shí)丙烯酰胺可經(jīng)皮膚吸收，相對(duì)來(lái)說(shuō)危險(xiǎn)性較大。

再次手工灌制凝膠基本為固定濃度膠，如果要灌制梯度膠，需要使用梯度混合儀，不僅操作復(fù)雜，而且無(wú)法保證批次的一致性。

最后堿性條件對(duì)于一部分蛋白來(lái)說(shuō)不能保證其穩(wěn)定性，如需要保證樣品條件需要更換中性緩沖體系。

基于以上各點(diǎn)，另一種緩沖體系的預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠作為商品化的產(chǎn)品在市場(chǎng)出現(xiàn)。

首先其膠內(nèi)緩沖體系為Bis-Tris-Cl體系，PH值為6.5-7.0。中性的緩沖體系，不僅可以保證絕大部分蛋白樣品的正確展現(xiàn)而且可以大大延長(zhǎng)聚丙烯酰胺凝膠的保存時(shí)間，此類(lèi)凝膠的保質(zhì)期通常在一年以上。相對(duì)于Laemmli系統(tǒng)此緩沖體系對(duì)蛋白的分辨能力更優(yōu)秀。

其次作為預(yù)制凝膠不再需要手工灌制，避免接觸丙烯酰胺類(lèi)毒性物質(zhì)。

再次作為商品化的預(yù)制凝膠具有不同的濃度和梯度可供選擇，客戶可以根據(jù)蛋白樣品的情況自由選擇合適的濃度和梯度，并且由于批量生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，可以保證凝膠產(chǎn)品的一致性。

NoninBio代理的Future PAGE™品牌預(yù)制膠，正是基于Bis-Tris的緩沖體系。具有優(yōu)秀的分辨率和穩(wěn)定性，避免您接觸毒性物質(zhì)，可以根據(jù)您的需要選擇適合您樣品的濃度梯度。更有獨(dú)特的緩沖體系，可以耐受蛋白樣品的雜質(zhì)干擾。

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