鱟試驗法——用熒光測定檢測細菌內(nèi)毒素含量的方法介紹

將熒光母素（fluorescamine)加入鱟試劑中，可使參與凝膠反應(yīng)的蛋白分子被熒光素標(biāo)記上。在形成凝膠的過程中，由于蛋白分子產(chǎn)生聚合結(jié)構(gòu)變化，結(jié)合于蛋白的熒光素因部分蛋白隨水分子運動而同時發(fā)生旋轉(zhuǎn)，導(dǎo)致熒光偏光度發(fā)生變化。令熒光偏光度為P，垂直熒光強度為I₁，水平熒光強度為I₂，則可見Р值由于凝膠化而增加，其值可按下式求得如下圖:

Р值與標(biāo)本中內(nèi)毒素的含量呈線性關(guān)系。

實驗時所用的熒光母素濃度常為0.02%。因為熒光母素濃度在0.05%以上時，聚合反應(yīng)有明顯的抑制，0.025%有輕微的抑制作用。

鱟試劑凝膠化，可以使P值增大，其反應(yīng)潛伏期的長短與P值增大的程度取決于內(nèi)毒素的濃度。當(dāng)內(nèi)毒素在10^-2μg/ml時，5分鐘內(nèi)P值開始增大，而10^-3μg /ml時，則在30分鐘仍看不出P值的增大，當(dāng)內(nèi)毒素<10^-3μg /ml時，濃度越小潛伏期越長。從而形成了P值上升的圖象，據(jù)此可求出回歸直線方程。

設(shè)傾斜度為b，潛伏期為t ，計算b/t值。如按不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素計算結(jié)果繪成曲線，可見內(nèi)毒素在10^-8～10^-3μg /ml范圍內(nèi)呈上升型直線，其相關(guān)系數(shù)為0.9804，方程式為:
Y = 0.0207 + 0.0797x
(R = 0.9804)

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求出被檢標(biāo)本中內(nèi)毒素的含量。
本試驗的操作均在0℃進行，測定時則在25℃進行。應(yīng)觀察60分鐘內(nèi)反應(yīng)的全過程，每隔5分鐘測定一次。