免疫PCR技術(shù)與其他常用免疫檢測技術(shù)相比的優(yōu)勢

多年來，研究人員一直依賴免疫檢測技術(shù)，如蛋白質(zhì)印跡、流式細(xì)胞術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA) ，但免疫PCR是一種相對較新的方法。通過將酶聯(lián)免疫 ELISA 與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 相結(jié)合，免疫 PCR 提供了 較高 水平的檢測靈敏度。

酶聯(lián)免疫吸附試驗
ELISA 是一種將分子吸附到固體表面（通常是微孔板孔）上的測定。從廣義上講，存在三種不同類型的 ELISA�？乖�下降 ELISA 是一種抗原與微孔板結(jié)合的方法。相比之下， ELISA 依賴于將適當(dāng)?shù)牟东@抗體吸附到微孔板孔中，然后在用另一種抗體檢測之前從樣品中吸附抗原。第三種形式，競爭 ELISA，當(dāng)分析物很小且不能同時與兩種不同的抗體結(jié)合時較 有用。它通常使用抗原向下設(shè)置。ELISA 操作簡單，運行相對 簡單 ，并且很容易適應(yīng)高通量篩選。

聚合酶鏈反應(yīng)
PCR 是一種用于擴(kuò)增特定 DNA 片段的技術(shù)，只需少量的起始材料即可進(jìn)行。它采用三步循環(huán)過程：1) dsDNA 的熱誘導(dǎo)變性以分離兩條互補(bǔ)鏈，2) 降低溫度以允許 PCR 引物結(jié)合，3) 使用 DNA 聚合酶產(chǎn)生目標(biāo) DNA 的互補(bǔ)拷貝順序。在傳統(tǒng) PCR 過程中，擴(kuò)增的 DNA 在凝膠上運行并用溴化乙錠染色。實時 PCR (rtPCR) ，也稱為定量 PCR (qPCR) ，而是將 PCR 產(chǎn)物的產(chǎn)生與熒光強(qiáng)度相關(guān)聯(lián)，在檢測發(fā)生時生成數(shù)據(jù)。 rtPCR 靈敏度 較 高，動態(tài)范圍大。

免疫 PCR ：兩全其美
只要有合適的抗體試劑可用，ELISA 就可以檢測任何蛋白質(zhì)，但是它可能不夠靈敏，無法識別低豐度的蛋白質(zhì)。雖然 rtPCR 提供指數(shù)信號放大，但它不能直接用于抗原檢測，因為它不使用抗體。免疫 PCR 通過抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物結(jié)合了這兩種檢測形式。您可以將任何類型的 ELISA 轉(zhuǎn)化為免疫 PCR 檢測，只需將檢測抗體替換為抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物即可。

例如，典型的ELISA 要求對目標(biāo)分析物具有特異性的抗體固定在微量滴定板的表面上。通過洗滌去除未結(jié)合的抗體，并在封閉步驟之后添加樣品。孵育后，洗去 表面 未結(jié)合的樣品，然后添加第二種分析物特異性抗體。如果使用直接檢測方法，該抗體將與檢測部分結(jié)合，例如酶或熒光染料。相反，間接檢測涉及另一輪洗滌步驟，然后添加綴合的抗物種二抗。

要將具有直接檢測的 ELISA 轉(zhuǎn)換為免疫 PCR 測定，只需將第二種抗原特異性抗體替換為抗體- 寡核苷酸偶聯(lián)物。在洗滌步驟之后，可以通過 rtPCR 擴(kuò)增和檢測 DNA。

將 ELISA 轉(zhuǎn)化為免疫 PCR 檢測
在開發(fā)免疫 PCR 檢測時，調(diào)整現(xiàn)有的 ELISA 是有效的方法 。應(yīng)優(yōu)化測定的每個步驟 max 值 以特定讀數(shù)，同時 min 背景信號。對于等效ELISA，可能已經(jīng)知道諸如板包被方法、洗滌緩沖液和封閉溶液的類型、樣品孵育步驟的長度和抗體的選擇等因素。

任何免疫測定的成功都取決于抗體試劑的質(zhì)量，但如果配置正確，免疫 PCR 與其他測定形式相比具有許多優(yōu)勢：
●高度靈敏—— 可以檢測皮克-飛克量的分析物
●只需要少量樣品
●與血清或尿液等復(fù)雜樣品兼容
●可重現(xiàn)
●提供多路復(fù)用選項
●抗體- 寡核苷酸偶聯(lián)物的產(chǎn)生

抗體- 寡核苷酸偶聯(lián)物的生產(chǎn)成本可能較高，因為傳統(tǒng)的偶聯(lián)方法需要大量的抗體，并且在純化步驟中會產(chǎn)生重大損失。然而，免疫PCR正變得越來越容易獲得，因為目前可以使用市場上的抗體- 寡核苷酸偶聯(lián)試劑盒、酶聯(lián)免疫ELSIA 試劑盒等。

為什么切換到免疫 PCR ？
與其他免疫檢測方法相比，免疫 PCR 提供了較高的靈敏度。這使其成為檢測復(fù)雜樣品中低豐度分析物的有效工具，因為樣品材料可以大幅度稀釋，從而降低背景影響并提高分析性能。該技術(shù)還能提供一致且可重復(fù)的數(shù)據(jù)。

蘇州阿爾法生物提供的免疫PCR試劑包括： ELSIA試劑盒、酶聯(lián)免疫ELSIA試劑盒、抗體、一抗、二抗、蛋白檢測試劑盒、PCR引物、PCR、QPCR相關(guān)生物試劑。