內(nèi)毒素檢測(cè)（凝膠法）的原理及詳細(xì)步驟

一，內(nèi)毒素檢測(cè)（凝膠法）的原理

酶原 內(nèi)毒素 凝固酶

凝固原 凝固酶 凝固素
 

革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)毒素催化了LAL中酶原的活化。初始活化速率由內(nèi)毒素的濃度決定�；罨�后的酶（凝固酶）水解了也存在于LAL中的凝血蛋白（凝固原）內(nèi)的特定化合鍵。水解后，產(chǎn)生的凝固素自行聯(lián)合，并形成凝膠狀膠塊。
 

凝膠法是一種用于革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)毒素的限量測(cè)試。凝膠法在37℃的水浴或干燥熱塊中放置的試管中操作。孵育一小時(shí)后，將試管翻轉(zhuǎn)180°。凝塊牢固地附著在試管底部，表明是陽(yáng)性反應(yīng)。如果液體從試管側(cè)面向下流動(dòng)，則結(jié)果是內(nèi)毒素陰性。
 

二，檢測(cè)所需主要設(shè)備及材料

試劑

– 鱟試劑（LAL）（PYROGENT™ 試劑）

– 內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）

– LAL 試劑檢查用水（LRW）(# W50-640, W50-100, W50-500)

器具

– 玻璃稀釋管，13 × 100 mm（# N207）

– 玻璃反應(yīng)管，10 × 75 mm（# N201, N205）

– 獨(dú)立包裝的血清吸管（選購(gòu)）

– 標(biāo)簽

請(qǐng)使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗(yàn)驗(yàn)證合格的無(wú)熱原器具。

設(shè)備

– 加熱塊或非循環(huán)熱水浴

– 移液器

– 計(jì)時(shí)器

– 漩渦混合器

– 試管架

三，操作步驟

本指南分步描述了如何進(jìn)行傳統(tǒng)凝膠法 鱟試劑（以下簡(jiǎn)稱LAL）試驗(yàn)。試驗(yàn)開(kāi)始前，先使試劑瓶溫度與室溫相同。

四，注意事項(xiàng)

– 使用配套的LAL和CSE 試劑

– 建議勿使用塑膠管稀釋內(nèi)毒素

– 遵循所有關(guān)于內(nèi)毒素漩渦震蕩次數(shù)的建議

– 使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗(yàn)驗(yàn)證合格的無(wú)熱原器具

– 使用前，先使試劑溫度與室溫保持相同

– 不要對(duì)LAL進(jìn)行漩渦震蕩

– 不要污染樣品、標(biāo)準(zhǔn)品、LRW 和器具

– 應(yīng)正確安裝、驗(yàn)證并維護(hù)設(shè)備儀器，避免影響凝膠形成