Moxi系列庫爾特細(xì)胞分析系統(tǒng)在PBMC檢測中的應(yīng)用

外周血單個核細(xì)胞（Periphery blood mononuclear cell，PBMC）是外周血中具有單個核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞，漿細(xì)胞等（如圖1）。在機(jī)體免疫系統(tǒng)中，PBMC細(xì)胞扮演著重要角色，不僅參與免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)，還是抗體藥物研發(fā)、感染性疾病、惡性血液疾病、疫苗開發(fā)以及移植免疫等領(lǐng)域的研究原材料。

圖1. PBMC細(xì)胞的組成

外周血中，除了PBMC外，還有無核的血小板、成熟的紅細(xì)胞、多核的粒細(xì)胞等，其體積、形態(tài)和比重均不相同。因此，可用密度梯度離心法將各種細(xì)胞與PBMC分離開，如Ficoll密度梯度離心法，離心后比重較大的紅細(xì)胞和粒細(xì)胞沉于管底，PBMC漂浮于分離液表面（如圖2）。

PBMC的質(zhì)量非常關(guān)鍵，直接決定下游的實驗研究或治療方案如何推進(jìn)。但是受限于技術(shù)方法，分離出來的PBMC難以避免會混有其他細(xì)胞，如紅細(xì)胞等。因此，對PBMC樣本進(jìn)行精確的細(xì)胞計數(shù)、精準(zhǔn)的細(xì)胞活率檢測，以確定細(xì)胞的質(zhì)量尤為重要。

PBMC樣本的特殊性：1.樣本通常來自患者，數(shù)量有限，用盡可能少的檢測次數(shù)獲取到最真實的濃度數(shù)據(jù)；2.紅細(xì)胞與PBMC大小相近，難以通過肉眼區(qū)分；因此常規(guī)的計數(shù)方法對此類樣本均無法滿足要求。采用血球計數(shù)板的顯微鏡下人工計數(shù)方式，通常計數(shù)幾十個細(xì)胞，繼而推斷整個樣本濃度，其計數(shù)體系非常小，影響統(tǒng)計學(xué)準(zhǔn)確性，同時細(xì)胞活率的判定依賴臺盼藍(lán)染色，人為主觀因素導(dǎo)致低準(zhǔn)確性和低重復(fù)性。基于圖像法的自動細(xì)胞計數(shù)儀，通過自動化消除了一些不可靠性，但其原理與依賴圖像的血球計數(shù)方式相同，仍然存在低準(zhǔn)確性和低重復(fù)性的問題。

為解決這種復(fù)雜細(xì)胞懸液的計數(shù)問題，需要加大計數(shù)體系，即計數(shù)更多的細(xì)胞，并避免對圖像的依賴。美國Orflo Technologies 公司的Moxi系列庫爾特細(xì)胞分析系統(tǒng)就是解決這一困難的利器，三個型號設(shè)備（Moxi Z，Moxi V和Moxi Go II）均采用細(xì)胞計數(shù)和體積測量行業(yè)的金標(biāo)準(zhǔn)——庫爾特原理，同時結(jié)合專利的微流控技術(shù)，對細(xì)胞樣本進(jìn)行精準(zhǔn)計數(shù)和體積測量。Moxi V和Moxi Go II還增加了流式熒光檢測模塊，實現(xiàn)對細(xì)胞樣本的熒光活率檢測及常規(guī)流式分析。設(shè)備一次運(yùn)行，可在幾秒內(nèi)完成數(shù)萬個細(xì)胞的計數(shù)及熒光檢測，計數(shù)體系大，不依賴圖像，對細(xì)胞樣本進(jìn)行絕對計數(shù)和三維立體的體積測量，具備更高的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

如圖3所示，是Moxi庫爾特細(xì)胞分析系統(tǒng)進(jìn)行PBMC計數(shù)的結(jié)果，一次計數(shù)18000多個事件，包括細(xì)胞和碎片。通過體積門控設(shè)置，將<3μm處的碎片峰（紅色框）排除，確保輸出的濃度數(shù)據(jù)中只包括真實的細(xì)胞信息。

Moxi V和Moxi Go II在細(xì)胞計數(shù)和體積測量的基礎(chǔ)上增加了流式熒光檢測通道，預(yù)設(shè)有PBMC檢測程序，實現(xiàn)一鍵調(diào)用，10秒即可完成細(xì)胞計數(shù)、體積檢測及活率檢測，同時可提供紅細(xì)胞污染數(shù)據(jù)（圖4）。

 

Moxi 系列產(chǎn)品采用庫爾特原理進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)和粒徑測量，其中高端型號配備流式熒光檢測通道，可進(jìn)行細(xì)胞活率、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)染效率、活性氧簇、線粒體膜電位等常規(guī)流式檢測。儀器設(shè)計小巧輕便，無需預(yù)熱，開機(jī)即用，預(yù)設(shè)程序，觸屏操控，運(yùn)行后10秒即可給出測試結(jié)果，使用后也無需清潔維護(hù)。無論是經(jīng)驗豐富的實驗高手，還是初試身手的實驗小白，Moxi系統(tǒng)都可以助您輕松完成實驗。

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