響應USP-NF第<86>章，PyroSmart NextGen®重組鱟試劑的驗證與應用

▲PyroSmart NextGen®重組鱟試劑

科德角國際的合作企業(yè)美國ACC公司（Associates Of Cape Cod）自2021年起，推出了PyroSmart NextGen®重組級聯(lián)試劑(rCR)，標志著細菌內毒素檢測（BET）領域的一次重大革新。

為了響應《美國藥典-國家處方集》（USP-NF）收錄第<86>章“使用重組試劑的細菌內毒素測試”，研究團隊使用PyroSmart NextGen®重組鱟試劑（PSNG）對替代細菌內毒素測試方法進行了一系列的驗證。
 

細菌內毒素檢測（BET）是一項關鍵的質量控制流程，利用從鱟血液中提取的鱟變形細胞裂解物（LAL）試劑，有效檢測和量化腸外藥品及醫(yī)療器械中的革蘭氏陰性菌內毒素。

PyroSmart NextGen®重組鱟試劑(PSNG)是市場上第一款完整的重組級聯(lián)試劑(rCR)，包含重組C因子、重組B因子、重組凝固酶原。該試劑的核心優(yōu)勢在于其徹底消除了LAL試劑批次間的差異性，并避免了因（1→3）-β-D-葡聚糖凝結途徑誤觸發(fā)的假陽性問題。此外，采用重組鱟試劑還符合動物福利保護的原則，推動了細菌內毒素檢測技術的可持續(xù)發(fā)展。
 

▲PyroSmart NextGen®重組鱟試劑

在美國，重組試劑被認為是藥典LAL試劑的替代品，因此，將這些重組試劑⽤于細菌內毒素檢測需要進⾏驗證，以證明結果等于或優(yōu)于LAL試劑測定的結果。

本研究通過一系列分析性能評估，包括線性、準確度、精密度、檢測范圍、定量限及特異性等，依據(jù)USP<1225>和ICH Q2指南，對PyroSmart NextGen®（重組鱟試劑）、Pyrochrome®（顯色法鱟試劑）及Pyrotell®-T（濁度法鱟試劑）根據(jù)內部驗收標準進行了全面比較，證實了其等效性。

▲Pyrochrome®（顯色法鱟試劑）

▲Pyrotell®-T（濁度法鱟試劑）

此外，還使用PyroSmart NextGen® 和兩種LAL試劑對三個批次的腸外藥物樣品進行了測試，以便根據(jù)USP<1085> 和USP<85> 直接比較方法適用性結果。這一過程嚴格遵循了USP<1085>和USP<85>的標準，旨在通過實際樣品測試來驗證并對比各方法在檢測細菌內毒素方面的適用性結果。

一、方法和結果
1、PyroSmart NextGen® 的分析性能（非產品特定方法驗證測試）
使⽤PyroSmart NextGen®定量的所有標準曲線濃度和三個單獨制備的USP-RSE（美國藥典參考標準內毒素）濃度均滿⾜線性、準確度、精密度、范圍和定量限規(guī)范（表1和表2）。因此，PyroSmart NextGen®的分析性能符合 USP<1225>和ICH Q2準則的規(guī)定。
 

2、PyroSmart NextGen® 的方法適用性（產品特定測試）
使⽤三種PPC（陽性產物對照）濃度測試的三批注射用檸檬酸鈉滿足線性、準確度、精密度、范圍、定量限、特異性和穩(wěn)定性標準（表3和表4）。根據(jù) USP<1085> 、USP<85> 、USP<1225> 和ICH Q2指南（雜質定量測試），PyroSmart NextGen®的產品特定⽅法適⽤性已得到證明。
 

3、PyroSmart NextGen®和LAL試劑的等效性測試
Pyrochrome®和Pyrotell®-T產生的結果均符合分析性能和方法適用性的內部驗收標準。將LAL試劑與PyroSmart NextGen®直接比較表明，PyroSmart NextGen®在所有參數(shù)上均具有相同或更好的結果（表 1-表4）。

4、PyroSmart NextGen®的精密度
額外的精確度分析表明，PyroSmart NextGen®的最大變異系數(shù)為20.89%，而Pyrochrome®的最大變異系數(shù)為23.22%，Pyrotell®-T的最大變異系數(shù)為29.24%（圖1）。這表明PyroSmart NextGen®在重復性測試中具有更高的穩(wěn)定性和可靠性。
 

▲圖1

所有含有可檢測（在本例中為添加）內毒素的樣品（三個單獨制備的USP-RSE濃度和注射用檸檬酸鈉樣品PPC）的相對回收率結果均在50-200%范圍內（圖2）。
 

▲圖2  

二、結論
PyroSmart NextGen®展現(xiàn)出卓越的性能，能夠有效從各類干擾藥物中回收內毒素，其回收率與傳統(tǒng)的LAL試劑相當。在針對如注射用檸檬酸鈉等多種產品的測試中，PyroSmart NextGen®在產品特定的方法適用性數(shù)據(jù)中符合準確性和精密度要求。

依據(jù)USP<1225>及ICH Q2雜質定量檢測指南，研究團隊對PyroSmart NextGen®進行了包括線性、范圍、定量限、特異性和穩(wěn)定性在內的全面分析評估，所有結果均符合標準，PyroSmart NextGen®具備全面的分析能力。

作為一種先進的重組級聯(lián)試劑（rCR），PyroSmart NextGen®完全符合所有內部驗收標準，且在測試多種類型樣品時，其表現(xiàn)等同于或優(yōu)于天然來源的LAL試劑，為細菌內毒素檢測領域提供了一種強有力的替代方案。