如何選擇合適的二抗分子類型？
| 如何選擇合適的二抗分子類型？ |
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二抗是在其它宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體，上面通常連有酶、熒光素或生物素等耦聯(lián)標記。二抗針對某一特定物種（如小鼠）的所有抗體（如IgG、IgM或IgA等）均具有反應性，因而使用標記的二抗可以免去對每個一抗進行標記，大大節(jié)省了時間和費用；此外，一個一抗分子可以同時結合幾個二抗分子，從而使信號大大增強，提高了實驗靈敏度。通常情況下，某一特定的實驗中可能同時有幾種二抗可供選擇，如何能選擇到最適合該實驗的二抗，需要綜合以下幾個方面進行考慮： 1. 選擇全IgG形式還是F(ab’)2片段，或者Fab片段二抗
 全IgG形式的二抗是從抗血清中分離出來的完整的分子；這些抗體有一個Fc部分和兩個與抗原結合的Fab部分，因此是二價的，也是性價比最高的。 F(ab’)2片段形式的二抗是用胃蛋白酶消化IgG去除Fc部分，剩下兩個靠二硫鍵連接的結合抗原的Fab部分，依然是二價的；該抗體可避免與Protein A /G或與Fc受體的結合， 還由于其分子本身比較好，更容易滲透入細胞組織結構內而靈敏度更高 。Fab片段形式的二抗是用木瓜蛋白酶消化IgG后得到的；Fab片段抗體由于只含有一個結合位點，可用來封閉內源性的免疫球蛋白。
2. 根據(jù)一抗的種屬來源和類型選擇二抗
二抗應選用與使用的一抗相同的物種來源，例如：如果一抗是小鼠源的抗體，二抗則選抗小鼠的二抗；如果一抗是從兔血清里制備的兔源抗體，則相應的二抗需要選擇抗兔的二抗。另外，二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。其中單克隆抗體的類別及亞類通常會在產品說明書中都會有描述，如果一抗是小鼠IgM，那么相應的二抗就應當是抗小鼠IgM。如果一抗是小鼠IgG的某一亞類（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合，或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以選擇抗IgG1的二抗。至于二抗本身是在什么動物中制備的對二抗的質量并無明顯的影響。 3. 根據(jù)實驗要求的特異性進一步篩選二抗
Anti-IgG (H+L)是最常用也是性價比最高的二抗形式，這類抗體和IgG分子的重鏈和輕鏈都可以反應，也可以和其他的免疫球蛋白家族（IgM，IgA，IgD,IgE）和亞家族反應，因為所有的免疫球蛋白都有相同的輕鏈。 Anti-IgG，Fc fragment specific這類抗體和IgG重鏈的Fc部分反應，與F(ab’)2或Fab無交叉反應，但可能與IgM或IgA有交叉反應；而抗IgG，Fcγ fragment specific則只與IgG重鏈反應，通常不能和IgA或IgM任何表位反應。 Anti-IgG，F(ab’)2 fragment specific則與Anti-IgG，Fc fragment specific則正好相反。
另外，與一個物種反應的二抗可能與其他物種發(fā)生交叉反應，除非這類抗體經過其他物種的血清蛋白吸附實驗。如Jackson 的Horseradish Peroxidase-conjugated AffiniPure Mouse Anti-Goat IgG (H+L) (min X Ms, Hu, Rb Sr Prot) 小鼠抗山羊二抗，就是經過了小鼠、人、兔血清的吸附， 其與小鼠、人、兔血清內蛋白（包括免疫球蛋白）的交叉反應降到最低。 當其他物種免疫球蛋白的出現(xiàn)可能導致交叉反應時，推薦使用這類抗體。 |
