使用CytoFLEX流式細(xì)胞儀檢測(cè)囊泡/外泌體
囊泡/外泌體天然存在于體液中，并穩(wěn)定攜帶了一些重要的信號(hào)分子。囊泡/外泌體相關(guān)功能的研究已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)，并有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用。
通常，因流式細(xì)胞儀無(wú)法檢測(cè)低于 250nm 的顆粒，因而并不是檢測(cè)囊泡/外泌體微顆粒的最佳選擇。而貝克曼庫(kù)爾特公司的 CytoFLEX 流式細(xì)胞儀的問(wèn)世，為流式檢測(cè)囊泡/外泌體微顆粒開(kāi)辟了蹊徑。
CytoFLEX是第一臺(tái)可檢測(cè)100 nm微顆粒的流式細(xì)胞儀，并具有可同時(shí)檢測(cè)13色熒光、單個(gè)樣本存儲(chǔ)量大等優(yōu)秀性能，為微顆粒的檢測(cè)提供了理想的檢測(cè)平臺(tái)。
材料與方法
1.試劑
2.樣本制備
數(shù)據(jù)分析
1.建立FSC / VSSC散點(diǎn)圖，檢測(cè)Megamix-Plus FSC beads（100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm），調(diào)整gain值。圈定100 nm - 900nm微顆粒分布區(qū)域，設(shè)定門MP Gate。同樣電壓條件下，樣本檢測(cè)管分布于MP Gate門內(nèi)的即為囊泡/外泌體微顆粒；
2.建立AnnexinV-FITC/APC雙參數(shù)散點(diǎn)圖，通過(guò)AnnexinV表達(dá)量的多少，區(qū)分不同類型的微顆粒。并建立CD63-PE/CD41-PC7雙參數(shù)的散點(diǎn)圖，來(lái)檢測(cè)不同類型的囊泡/外泌體微顆粒，細(xì)胞表面抗原的不同。
*實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)由Kaluza軟件分析
結(jié)果
1. Megamix-Plus FSC beads 檢測(cè)結(jié)果
根據(jù)微球（100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm）的分布，界定微顆粒的位置，將門命名為”MP Gate”。
2. 囊泡/外泌體微顆粒檢測(cè)結(jié)果
圖A中MP Gate顯示囊泡/外泌體微顆粒；圖B和C為相應(yīng)熒光通道中，微顆粒的自發(fā)熒光；圖D中顯示兩群Annexin-V陽(yáng)性細(xì)胞群標(biāo)記囊泡/外泌體微顆粒。Annexin-V dim在圖中用綠色顯示，該群微顆粒表達(dá)CD41不表達(dá)或低表達(dá)CD63，且細(xì)胞較小；Annexin-V high在圖中用紅色顯示，該群微顆粒表達(dá)CD41+CD63+，且細(xì)胞相對(duì)較大。
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