HOK細胞人口腔角質細胞使用說明
HOK 細胞人口腔角質細胞
品 牌：美國 ATCC
細胞生長：HOK 細胞人口腔角質細胞貼壁生長
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞數(shù)量：5*10^5cells/ml 1ml
細胞傳代：1:2 傳代
細胞純度：93％
細胞活力：95％
（6） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
HOK 細胞人口腔角質細胞增殖能力取決于細胞取材、培養(yǎng)技術、培養(yǎng)條件等綜合因素。請按照正確的培養(yǎng)
方法來解凍、傳代，以此保證細胞具備良好的增殖能力，方便您的后繼研究順利進行,
貨號 規(guī)格 培養(yǎng)基 運輸 保存
YJ1658 1ml/株 89%基礎培養(yǎng)基+10%FBS+1%雙抗 復蘇運輸 液氮保存
質量控制： 本細胞經(jīng)過了檢測，不含有細菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原體。
培養(yǎng)條件：37℃，5% CO2，PH 值7.2~7.4，無菌恒溫培養(yǎng)。
用途： 本產(chǎn)品只提供給進一步的科研使用，不可應用于治療等其他方面。
細胞相關操作（注意：細胞操作都需嚴格按照無菌操作）
收到復蘇好的貼壁細胞的處理方法：
1. 先從外包裝盒拿出細胞瓶，在細胞瓶表面噴一層酒精，并小心去掉封口膜；
2. 在顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)，并確定是否染菌，如有染菌，請立即拍照，并將細胞丟掉；
3. 將培養(yǎng)瓶置于 37°C，5% CO2 的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 4-6 小時；
4. 倒掉多余的培養(yǎng)基，留正常體積的培養(yǎng)基；
5. 重新將培養(yǎng)瓶置于 37°C，5% CO2 的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜
6. 第二天傳代。
收到凍存細胞的處理方法：
1.37°C 水浴預熱培養(yǎng)基；
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C 水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細胞）；
3.在超凈臺中加入5ml 培養(yǎng)基重懸細胞，1000rpm 離心5min；
4.棄上清，加入5ml 培養(yǎng)基重懸細胞后轉入 T25培養(yǎng)瓶中，輕輕晃勻；
5.置于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；
6.第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞傳代
1.當細胞融合度達到90%以上時，給細胞傳代；
2.37°C 水浴預熱培養(yǎng)基；
3.在超凈臺中，棄培養(yǎng)基，加入2-5mlPBS 清洗細胞后，再加入1ml 胰酶消化細胞；
4.顯微鏡下觀察到細胞變圓，有細胞開始脫離瓶壁時，加入5ml 培養(yǎng)基終止消化；
5.用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細胞，并輕輕吹打將細胞吹散；
6.將細胞移入離心管中，1000rpm 離心5min；
7.棄上清，加入15-20ml 的培養(yǎng)基重懸細胞后轉入 T75培養(yǎng)瓶中或按適當比例傳到 T25瓶中（確保細胞貼壁
后融合度在25-50%之間），細胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶），混勻細胞懸液，確保均
勻分布；
8.將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細胞凍存
1.37°C 水浴預熱培養(yǎng)基；
2.消化細胞后給細胞計數(shù):
1)洗凈晾干血小板計數(shù)板和蓋玻片，將蓋玻片完全覆蓋計數(shù)區(qū)；
2)充分混勻細胞，取少量(0.1-0.5ml)細胞懸液與等體積的染色液臺盼藍混合，移液器吹吸混合均勻，用移液
器取20ul 混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細胞，以細胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳；
3)顯微鏡下，數(shù)四個計數(shù)區(qū)的總細胞數(shù)，無活性細胞染成藍色，活細胞不被染色；
4)細胞密度=細胞總數(shù)/4×10000×2；
這里10000是不變的，因為計數(shù)的細胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm 即10-4cm3計數(shù)池內(nèi)，1cm3=1ml，將
四個計數(shù)區(qū)的細胞數(shù)除以4取平均數(shù)，乘2是補償加等體積臺盼藍形成的稀釋。
5)細胞活性=活細胞數(shù)/細胞總數(shù)×100%。
注:細胞密度高時，可調(diào)整細胞懸液和臺盼藍的比例，計數(shù)時乘以相應的稀釋倍數(shù)即可。
3.當細胞密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時，可以凍存細胞。
4.在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管，1000rpm 離心5min。
5.棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO 的混合液重懸細胞，并調(diào)整細胞密度為1-3×106/ml。
6.將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。
7.將裝有細胞的凍存管放入程序降溫凍存盒，-20°C 放1-2h 后，-80°C 過夜，然后快速轉移到液氮中。
