人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀(guān)察和鑒定方法

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞爬片準(zhǔn)備：細(xì)胞換液后直接在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)特征，并作相差攝影，同時(shí)進(jìn)行常規(guī)HE染色觀(guān)察并攝片。鑒定采用DAB免疫組織化學(xué)法，在6孔培養(yǎng)板中放置載玻片，在玻片上植入2ml含有1×106的細(xì)胞懸液，待細(xì)胞貼壁后，取出載玻片，放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS沖洗3次，每次2min,滴加3%H2O2室溫孵育10min，PBS沖洗3次，每次2min,以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相關(guān)抗原多抗工作液，放入濕盒內(nèi)4℃過(guò)夜，同時(shí)另一蓋玻片不加一抗作陰性對(duì)照。次日，用PBS沖洗3次，每次2min,滴加辣根酶標(biāo)記的羊抗兔IgG, 37℃孵育30min, 用PBS沖洗3次，每次2min,用DAB底物混合工作液顯色，顯微鏡下觀(guān)察，待出現(xiàn)特異性染色后，終止顯色，進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明，封片，相差顯微鏡下觀(guān)察攝影。

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Sciencell #8000）的形態(tài)學(xué)觀(guān)察：相差倒置顯微鏡下觀(guān)察，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞貼壁單層生長(zhǎng)，呈短梭狀或鋪路石樣鑲嵌排列，細(xì)胞為扁平多角形，邊界清楚，胞漿豐富。胞核清晰可見(jiàn)，為圓形或橢圓形。原代培養(yǎng)細(xì)胞，于接種后2h開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)，傳代細(xì)胞約半小時(shí)后即開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)。原代細(xì)胞一周左右可長(zhǎng)滿(mǎn)，傳代細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，有時(shí)可見(jiàn)多核細(xì)胞。

Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化鑒定：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Sciencell #8000）Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化染色可見(jiàn)細(xì)胞呈圓形、梭形或多邊形，胞漿內(nèi)可見(jiàn)棕黃色顆粒，核周密集，而對(duì)照組內(nèi)未見(jiàn)著色。證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞為內(nèi)皮細(xì)胞。

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