Western blot免疫蛋白印跡法的發(fā)展、應(yīng)用及傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)跟半干轉(zhuǎn)優(yōu)缺點

WB最初是由Towbin等人于1979年提出，并稱之為免疫印跡法(immunoblotting)[1]
后于1982年由Burnette將免疫蛋白印跡法稱為Western Blotting[2]。
 

使用含8M尿素的18%聚丙酰胺凝膠分離大腸桿菌核糖體總蛋白后分別進行考凝膠馬斯亮染色（圖A）與膜上蛋白印跡酰胺黑染色（圖B）
 

 
Western Blot應(yīng)用[3]：

  Western Blot法實際上是凝膠電泳技術(shù)、固定化技術(shù)及分子親和技術(shù)三者融為一體的綜合性技術(shù)，其核心在于把WB轉(zhuǎn)膜。

WB轉(zhuǎn)膜是將通過電泳分離后的蛋白轉(zhuǎn)移到固相載體上，如PVDF膜。我們常用電泳印跡法進行蛋白轉(zhuǎn)移，電泳轉(zhuǎn)移的方式分為濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)。兩者雖然名稱不一，但是原理是一樣的，使用三明治結(jié)構(gòu)（即濾紙-膜-凝膠-濾紙的結(jié)構(gòu)），在電場正負極作用下將帶負電的蛋白從凝膠轉(zhuǎn)移至載體膜上。蛋白呈現(xiàn)負電的原因是因為蛋白等電電PI一般為6，在溶液中PH>PI時蛋白呈負電[4]。
 
傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)跟半干轉(zhuǎn)，各有優(yōu)缺點。100KD以下蛋白適用半干轉(zhuǎn)，且半干轉(zhuǎn)速率快。因為半干轉(zhuǎn)的電流不會側(cè)漏，全都在濾紙之間，所以轉(zhuǎn)的效率比較高，速度快，缺點是有效離子濃度衰減快，可能幾分鐘就耗盡了，這個時候大蛋白還沒來得及轉(zhuǎn)上，再加上產(chǎn)熱大，可能燒糊。相反的，濕轉(zhuǎn)則是有效電流少，不全在濾紙之間，會從緩沖液間側(cè)漏，所以轉(zhuǎn)的效率低下，速度就慢了，但是有效離子濃度高，能夠長時間進行轉(zhuǎn)膜，因此適用于100KD以上的大分子蛋白的轉(zhuǎn)膜。那么能不能既能有效減少電流側(cè)漏的同時，又不斷補充有效離子的方法呢？有，中科通儀就做到了。

中科通儀自主研發(fā)生產(chǎn)的專利產(chǎn)品M-Blot快速轉(zhuǎn)膜儀是濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)的結(jié)合，從根本上解決了傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)的一些問題。
 
M-Blot快速轉(zhuǎn)膜儀想了解的同學(xué)，鏈接在這里。