微透析HPLC法在研究延胡索乙素在清醒大鼠腦局部藥動學的應用

延胡索乙素（THP）是罌粟科紫堇屬植物延胡索的主要活性成分，又稱為四氫巴馬汀。具有鎮(zhèn)痛、催眠、降低冠脈阻力及增加血流量等多個與中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關的藥理作用，臨床上應用較為廣泛。目前，國內(nèi)外對延胡乙素的研究多集中在體內(nèi)（即血漿中）藥動學研究，且其研究多采用組織勻漿的方式，但其藥物治療的作用靶部位在腦部，故對腦部藥物的監(jiān)測十分必要。

微透析具有活體連續(xù)取樣、動態(tài)觀察等特點，尤其適合于深部組織和器官的活體生化研究。本實驗擬采用微透析技術進行清醒大鼠腦局部藥動學研究，消除了麻醉狀態(tài)對藥物分布的影響，獲得的生理參數(shù)最接近動物正常指標，為其腦靶向制劑的研究與開發(fā)提供實驗參考。

腦微透析探針套管的埋植及探針的植入

大鼠麻醉后（10％水合氯醛3.0ｍＬ·ｋｇ^-１腹腔注射）固定在立體定位儀上，頭部備皮并消毒，于頭蓋骨平行與矢狀縫做一個２cm的中線切口，暴露頭頂顱骨，分離骨膜等軟組織。按照大鼠腦圖譜以前鹵作為定位基點，坐標為（左側大腦）ＡＰ：+0.2ｍｍ；ＭＬ：+3.5ｍｍ；ＤＶ=-3.5ｍｍ。定位后用顱骨鉆鉆一個直徑為1.2ｍｍ的小孔，刺破硬腦膜，植入帶管心針的套管，而后用牙科水泥固定，保證套管不隨動物的正常活動而移動或松動。待牙科水泥硬結后，往大鼠腹腔注射青霉素（８萬Ｕ），在25～30 ℃條件下飼養(yǎng)３～４ｄ，恢復至正常的行動與飲食，外形無萎靡不振等不良手術反應。探針套管埋植成功后，將浸泡在肝素鈉注射液中３０min的腦探針以硬腦膜為標準向腹側垂直插入，固定于大鼠紋狀體。

體內(nèi)回收率樣品的收集與測定

探針植入后，用延胡索乙素質量濃度為1.1721μｇ·ｍＬ^-１的 含藥人工腦脊液以1.5μＬ·min^-１流速灌流探針。平衡１ｈ后，每隔20min收集一次透析液樣品，灌流 10ｈ，測定含藥人工腦脊液和透析液樣品中藥物濃度，用反透析法測定延胡索乙素的體內(nèi)回收率。按以下公式計算體內(nèi)回收率。結果見下圖。

延胡索乙素腦微透析探針體內(nèi)回收率的穩(wěn)定性

結果表明，當灌流液流速為1.5μＬ·min^-１時，10ｈ內(nèi)，腦探針中延胡索乙素體內(nèi)平均回收率為32.03％，RSD為5.65％。延胡索乙素的體內(nèi)回收率在10ｈ內(nèi)能保持相對穩(wěn)定。

本實驗研究了清醒動物組織內(nèi)游離藥物濃度隨時間變化趨勢及其藥動學參數(shù)。一般情況下，體內(nèi)真正發(fā)揮作用的是游離的藥物濃度，而與血漿蛋白或者其他特殊組織結合的部分只能起到藥物的一種臨時儲庫的作用。所以，本實驗結果可反映組織中真正起藥效作用部分的延胡索乙素的藥動學特征。腦部微透析取樣方法可在體評價含延胡索乙素的腦部靶向制劑，為靶向制劑的開發(fā)與臨床應用提供實驗參考。

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