外泌體提取方法及其優(yōu)缺點

外泌體研究持續(xù)升溫，幾乎所有研究者都面臨這樣一個問題：如何獲得足夠多的高純度外泌體。外泌體的提取方法有很多，但提取的外泌體含量、純度等各有優(yōu)缺點，我們先來了解下幾種常用的外泌體分離方法。

1、差速離心法

差速離心法是根據(jù)不同蛋白質(zhì)分子及囊泡、細胞及細胞碎片等在均勻懸液中沉降速度的差異，通過逐漸增加離心力或離心時間，分離沉淀或上清的方法來提取。1）低速離心去除細胞和凋亡碎片，2）更高速離心以消除更大的囊泡，3）超高速離心沉淀外泌體，然后用0.22μｍ的濾膜去除凋亡小體、微泡等進一步純化。
差速離心法操作簡單，適合大體積樣本中外泌體的分離、提取，不適用于微量及珍貴樣本的研究。

2、密度梯度離心法

目前應(yīng)用較多的是蔗糖密度梯度離心法，將細胞混合懸液或勻漿置于蔗糖介質(zhì)的頂部，通過離心力的作用使細胞分層、分離，將外泌體從混雜物質(zhì)中分離出來，然后使用濾膜進一步純化。
蔗糖密度梯度離心法獲取的外泌體純度高，已作為藥物載體用于臨床試驗。但前期準備工作繁瑣，操作復(fù)雜耗時長。

3、qEV尺寸排阻法

qEV是采用尺寸排阻SEC原理按照分子粒徑進行分段分離的方法。將生物樣品流經(jīng)具有固定孔隙的SEC填充物，吸附粒徑較小的分子如蛋白、脂類等，而較大粒徑的分子或顆粒不能進入孔隙。在緩沖液的作用下，較大粒徑的囊泡（外泌體）流速快，在特定的階段會被洗脫出來進入樣品收集管，成為實驗樣品。而小分子具有較長的保留時間，最后被洗脫出來。

qEV技術(shù)有效避免了超速離心和密度梯度離心等傳統(tǒng)方法分離囊泡（外泌體）時，由于超高離心力與蔗糖溶液高粘性造成的HDL蛋白或囊泡的聚集污染，也避免了傳統(tǒng)方法對于囊泡（外泌體）的膜結(jié)構(gòu)的損傷，使其保留完整的生物活性；不過，該方法耗時較長，不適合大量樣本處理。

4、基于聚合物的沉淀技術(shù)

基于聚合物的沉淀技術(shù)通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合，在4℃溫育并低速離心。用于聚合物沉淀的最常見聚合物之一是聚乙二醇（PEG）。用這種聚合物沉淀具有許多優(yōu)點，包括對分離的外泌體影響小、pH中性等。目前大多數(shù)快速分離外泌體的商品化試劑盒都是基于此方法。 然而基于聚合物的沉淀方法可能會同時分離非囊泡污染物（包括脂蛋白）外泌體純度不高。

華盈生物自主研發(fā)的Exosome Isolation Q3（簡稱EIQ3）系列外泌體提取劑盒，不僅有效提高外泌體得率，同時能夠顯著減少雜蛋白殘留（如血清高豐度蛋白）。該試劑盒可以實現(xiàn)血清、血漿、尿液、細胞上清等液質(zhì)樣本中外泌體的快速提取，為后期外泌體研究的數(shù)據(jù)穩(wěn)定性和可靠性提供保障。

華盈生物擁有高純度的外泌體提取方案可以實現(xiàn)多種類型樣品中外泌體的分離，包括血漿/血清、細胞上清、唾液、房水、胸腔積液、腦脊液、尿液、膽汁等多類型樣本。針對不同類型的樣本分別采用專屬的外泌體提取方法，如超速離心、尺寸排阻、密度梯度離心等。還可以提供外泌體三項鑒定以及外泌體蛋白組學等服務(wù)助您解決外泌體研究中的各種難題。