使用 MANTIS® 分液器在器官移植中進(jìn)行自動化、可再現(xiàn)的 HLA 抗體篩查

背景
人類白細(xì)胞抗原 (HLA) 系統(tǒng)是我們適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的一部分，在疾病防御和器官移植中都發(fā)揮著重要作用。帶有與受者匹配的 HLA 標(biāo)記的供者排斥器官的幾率較小。

荷蘭拉德布德大學(xué)醫(yī)學(xué)中心的醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗室 (LMI)的研究者從潛在器官受體的血清中篩選出 HLA 特異性抗體。為避免供體器官的超急性排斥，檢測針對 HLA 標(biāo)志物的抗體是必要的。排斥可能是由輸血、移植或懷孕引起的。該實驗室每季度進(jìn)行一次篩查，以檢測患者血清中的這些有害抗體。

可以通過將一名患者的血清與來自具有不同 HLA 標(biāo)記的不同個體的 60 多種獨特的淋巴細(xì)胞懸浮液進(jìn)行交叉匹配，來檢測這些抗體。這也稱為補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性 (CDC) 測試。

在這項研究中，FORMULATRIX®的MANTIS®液體處理器用于將分離好的淋巴細(xì)胞分配到準(zhǔn)備好的 Terasaki 板中。

材料和方法
首先，使用 ART Robbins (Sunnyvale, CA) 血清分配器將 1μl 患者血清分配到 Terasaki 板 (Greiner) 中。使用密度梯度 Lymphoprep (Elitech Group) 或液氮方法從血液中分離供體淋巴細(xì)胞，然后用 CFDA C195 (Invitrogen) 染料培養(yǎng)并洗滌。然后制備每毫升 4 x 106 個細(xì)胞的淋巴細(xì)胞懸浮液。

MANTIS® 分液器用于將 1 μL 分離的淋巴細(xì)胞分配到準(zhǔn)備好的 Terasaki 板中。之后的步驟包括添加兔補(bǔ)體 (Immucore, Norcross, GA) 和 EDTA (Merck, KGaA, Darmstadt, Germany)、血紅蛋白和碘化丙啶的懸浮液，并進(jìn)行培養(yǎng)。

在最后添加步驟之后，在倒置熒光顯微鏡（Leitz Leica Diavert Inverted Microscope withfluorescent light illuminator (480-525nm) Oculair 10x）下觀察微孔板以確定患者血清和供體淋巴細(xì)胞之間是否存在陽性或陰性反應(yīng)。

根據(jù)熒光染色結(jié)果確定殺滅百分比 (% kill) 的測量結(jié)果（參見圖 1）。殺滅百分比是陽性細(xì)胞（紅色）占陽性和陰性細(xì)胞總數(shù)（綠色）的百分比。百分比得分如表 1 所示。

表 1: 殺滅百分比得分

圖 1: 明顯易觀察的淋巴細(xì)胞樣本 (A) 陰性反應(yīng)，綠色。 (B) 陽性反應(yīng)，紅色。 (C) 強(qiáng)陽性反應(yīng)，紅色
 

結(jié)果與結(jié)論
由于現(xiàn)有設(shè)備不再受到支持，因此實驗室必須找到一種替代的自動分液器，用于將準(zhǔn)備好的淋巴細(xì)胞添加到 Terasaki 板中。手動分液在實驗過程中會引入可變性量，這對于研究者而言是不可接受的。

越來越多使用不再受支持的設(shè)備進(jìn)行 HLA 篩查的實驗室將需要更換這種過時的技術(shù)，因此 LMI 的團(tuán)隊同意分享他們的評估結(jié)果，以使參與這項重要工作的更廣泛的學(xué)術(shù)圈受益。

與手動移液器加液相比，FORMULATRIX公司的 MANTIS 儀器被認(rèn)為是一種用于添加淋巴細(xì)胞的優(yōu)越技術(shù)，并已成功應(yīng)用到實驗室的常規(guī)工作流程中。它能在更短的時間內(nèi)獲得結(jié)果，并且具有更高的一致性和準(zhǔn)確性。
 

感謝和致謝
FORMULATRIX®非常感謝Yvonne van Berkel（senior analyst Cellulaire Immunologie en Histocompatibiliteit）和 LMI 團(tuán)隊在評估 MANTIS® 分液器的 HLA 工作流程方面所做的工作，以及在本應(yīng)用說明中提供的數(shù)據(jù)結(jié)果。該團(tuán)隊的其他成員為Siham Akdimi、Gaby Derksen、Suzanne Hendriks 和 Jeroen Slager。