針對SARS-CoV-2變異株核衣殼蛋白的單克隆抗體的開發(fā)與表征

Omicron變異株及其亞譜系的出現(xiàn)改變了COVID-19大流行進程。盡管毒性有所降低，但其傳播性仍然很高�？焖倏乖瓩z測（RAT）因操作簡便、成本低等優(yōu)勢被廣泛用于SARS-CoV-2感染的簡易診斷，但隨著核衣殼蛋白（NP）的不斷變異，現(xiàn)有的RAT對Omicron譜系的敏感性逐漸下降，因此開發(fā)出能夠識別變異毒株NP的抗體對提升RAT檢測靈敏性至關重要。 針對這一需求，來自加拿大公共衛(wèi)生部、國家微生物實驗室的Tom Gräfenhan和Ian Wayne Cheney聯(lián)合發(fā)表題為“Development and characterization of monoclonal antibodies recognizing nucleocapsid protein of multiple SARS-CoV-2 variants”的研究成果，他們鑒定出 7 種對 SARS-CoV-2 變異株和重組核衣殼蛋白（rNP）表現(xiàn)出強烈反應性的小鼠單克隆抗體，其中5種抗體對兩種奧密克戎亞譜系在內(nèi)的變異株（VOCs）具有特異性，值得在診斷檢測開發(fā)中進行進一步的適用性測試。該研究中基于質(zhì)譜的抗體序列分析使用PEAKS^®️ AB完成。


材料和方法

1、SARS-CoV-2特異mAb雜交瘤的生成與篩選

2、抗體對多種SARS-CoV-2變體的反應性測試
11個mAbs均與原始SARS-CoV-2 rNP反應，7個對部分變體有反應，5個對P.1反應強烈，僅2個對B.1.617.2有反應（表2）。 a, marks -, +, ++, +++, and ++++ were based on the band density visualized by experienced technician. -: no band observed. 、b, recombinant nucleocapsid protein of the original strain (Wuhan strain); 
c, gamma-irradiated reference strain (hCoV-19/Canada/ON_ON-VIDO-01-2/2020, EPI_ISL_425177); 
d, all strains were loaded at 1 × 104 pfu/lane for SDS-PAGE.

3、SARS-CoV-2 NP單抗對SARS-Cov-1、MERS和HCoV的交叉反應性測試
4、mAbs與SARS-CoV-2核衣殼蛋白的結(jié)合親和力測定

5、免疫噬斑及Omicron亞譜系結(jié)合力實驗

小結(jié)

 

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