雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說明書

【產(chǎn)品名稱】
通用名：雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Infectious Bronchitis Virus (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 雞傳染性支氣管炎是由傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起雞的一種急性、高度接觸傳染性呼吸道傳染病，本病呈世界性分布，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的最主要疫病之一。疫苗免疫是預(yù)防和控制雞傳染性支氣管炎發(fā)生的最有效途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實(shí)際的疫苗免疫效果，直接關(guān)系到免疫雞群對病毒的抵抗力。
    本試劑盒適用于：雞血清抗體的檢測，以確定被檢雞是否感染過雞傳染性支氣管炎病毒或免疫雞體內(nèi)抗體水平；評估雞群感染IBV的風(fēng)險(xiǎn)程度；了解雛雞母源抗體水平，為IBV免疫程序的制定提供參考。

【原    理】
本試劑盒由預(yù)包被雞傳染性支氣管炎病毒重組N蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)，在酶標(biāo)板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有雞傳染性支氣管炎病毒的抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有傳染性支氣管炎病毒抗體。
【試劑盒組成】

序號	名稱	規(guī)格/96T×1	規(guī)格/96T×2	規(guī)格/96T×5
1	酶標(biāo)記物	11ml×1(紅蓋)	11ml×2(紅蓋)	26ml×2(紅蓋)
2	樣品稀釋液	50ml×1(黃蓋)	50ml×1(黃蓋)	200ml×1(透明)
3	20X濃縮洗滌液	40ml×1(白蓋)	40ml×1(白蓋)	200ml×1(透明)
4	底物液A	6ml×1(白蓋)	11ml×1(白蓋)	26ml×1(白蓋)
5	底物液B	6ml×1(黑蓋)	11ml×1(棕蓋)	26ml×1(黑蓋)
6	終止液	6ml×1(黃蓋)	11ml×1(黃蓋)	26ml×1(黃蓋)
7	陽性對照	1.0 ml×1(紅蓋)	1.5 ml×1(紅蓋)	2.0 ml×1(紅蓋)
8	陰性對照	1.0 ml×1(綠蓋)	1.5 ml×1(綠蓋)	2.0 ml×1(綠蓋)
9	酶標(biāo)板	96T×1	96T×2	96T×5
10	蓋板膜	1	2	5
11	自封袋	1	1	2
12	說明書	1	1	1
13	稀釋板	1	2	5

 
【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清先按10倍稀釋（如在稀釋板中加入90μl樣品稀釋液再加10μl血清，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入樣品稀釋液90μl，再加入稀釋后的血清10μl。
注：樣本稀釋比例相當(dāng)于1:100。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對照≤0.2，陽性對照≥0.6。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.C.O（臨界值）=2.1× 陰性對照孔均值（陰性對照孔均值低于0.1時(shí)以0.1計(jì)算）。
2.未曾免疫雞群：樣品A值≥C.O為陽性；樣品A值＜C.O為陰性。
3.免疫雞群：監(jiān)測并記錄樣本當(dāng)時(shí)的抗體水平，根據(jù)結(jié)果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動向。

【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒IgG抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評估。

【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號試劑組分不得混用。