M2點樣儀助力沙門氏菌血清分型檢測
瀏覽次數(shù):378 發(fā)布日期:2025-2-20
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沙門氏菌是一種能引起食源性疾病的細菌,廣泛存在于各種食物、水、土壤以及動物糞便中。世界范圍內(nèi)每年患病人數(shù)約9500萬例,癥狀表現(xiàn)為腹瀉、發(fā)燒、腹部痙攣和嘔吐等,嚴重可導(dǎo)致脫水性敗血癥甚至死亡。其血清亞型超過2500種,分型通常與宿主或地理位置有關(guān),傳統(tǒng)的凝集法不僅需要有豐富的技術(shù)經(jīng)驗,消耗大量的試劑和樣品,檢測周期也較長。相比之下,蛋白微陣列法(蛋白芯片檢測技術(shù))快速、特異性強、操作簡單,同時不受限于數(shù)據(jù)庫。另外,利用不同的特異性抗體檢測多種抗原血清,可在一次實驗中分析多種病原體。
2024年4月,來自德國萊布尼茨光子技術(shù)研究所和耶拿大學感染診斷學研究中心的Ralf Ehricht教授團隊,在Pathogens雜志上發(fā)表了一篇題目為“A Proof-of-Concept Protein Microarray-Based Approach for Serotyping of Salmonella enterica Strains”的文章。基于蛋白微陣列(蛋白芯片檢測技術(shù))對腸道沙門氏菌進行血清分型。
該團隊收集10種沙門氏菌免疫血清,并用緩沖液分別稀釋6、8、10和20倍,大腸桿菌和 PBS 緩沖液為陰性對照,
德國M2-Automation生物芯片點樣儀以17 × 17微陣列點樣到96孔板(孔內(nèi)底部功能化處理),每種樣品重復(fù)點印至少四次(單孔內(nèi)4個重復(fù)),點間距0.22 mm,靜置偶聯(lián)10分鐘后,制備成微孔板蛋白芯片(如圖1)。
圖1:腸道沙門氏菌亞群蛋白微陣列芯片
(左圖:10種沙門氏菌免疫血清1:6/1:8/1:10/1:20稀釋后的點樣陣列排布,4個重復(fù)陣列;右圖:單孔內(nèi)陣列示意圖)
隨后將32種不同的腸道鏈球菌亞型和1種邦戈沙門氏菌的菌株細胞,大腸桿菌細胞、PBS緩沖液分別加到微孔板蛋白芯片上,用HRP標記的抗沙門氏菌多克隆抗體雜交,繼而加入TMB(四甲基聯(lián)苯胺)底物顯色進行斑點檢測和數(shù)據(jù)分析(如圖2)。
圖2:基因分型檢測示意圖:沙門氏菌O或H抗原與特異性免疫血清結(jié)合,被酶標捕獲抗體捕獲,最后使用TMB(四甲基聯(lián)苯胺)底物催化顯色,進行信號檢測。
結(jié)果:基于微陣列的斑點檢測和數(shù)據(jù)分析,結(jié)合所有點樣血清類型,顯示出血清分型的高度準確性和特異性(如圖3)
圖3: 基因分型的結(jié)果分析(準確度、靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值)
微陣列檢測具有足夠的靈敏性和特異性,可有效用于血清分型或菌株篩選,是一種極具前景的快速檢測手段和方法。
原文鏈接:https://doi.org/10.3390/ pathogens13050355
M2-Automation成立于2003年,總部位于德國柏林,是一家創(chuàng)新技術(shù)開發(fā)公司,專注于微量/超微量、非接觸式自動化移液和生物芯片點樣技術(shù)。儀器準確性、精確性高,重復(fù)性好,全程自動化點樣,同時可根據(jù)客戶需求進行定制。
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