Apogee Flow助力COVID-19重癥感染導(dǎo)致凝血和止血障礙研究

凝血功能紊亂是COVID-19致病性的主要因素，但關(guān)于細(xì)胞外囊泡（EVs）和殘留細(xì)胞（RCs）參與的研究數(shù)據(jù)有限。使用Apogeeflow 納米流式儀分析EVs中CD61、CD235a、CD45和CD31的含量，分別用于檢測(cè)血小板、紅細(xì)胞、白細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞，而磷脂酰絲氨酸EVs/RCs則通過(guò)乳酸粘附素的結(jié)合表示促凝劑催化。忽略細(xì)胞來(lái)源D-二聚體增加的患者表現(xiàn)出最高的RCs和sEVs數(shù)量。血小板活化，反映在CD61+和乳酸粘附素+ mEV和RCs水平升高，與凝血障礙有關(guān)。低D -二聚體患者可以通過(guò)CD41a + sEVs的四跨蛋白特征與對(duì)照組區(qū)分開來(lái)，這表明循環(huán)血小板sEVs亞群的變化可能在COVID感染期間具有一定預(yù)后價(jià)值。

研究背景與目的:

嚴(yán)重的COVID-19感染會(huì)引起頻繁的凝血和止血障礙，幾種COVID-19感染的常見實(shí)驗(yàn)室結(jié)果包括血漿D-二聚體和纖維蛋白原水平高、白細(xì)胞增多伴淋巴細(xì)胞減少、血小板增多和貧血。關(guān)于COVID-19應(yīng)答對(duì)細(xì)胞介導(dǎo)的止血的影響的數(shù)據(jù)有限。血小板還通過(guò)膜受體直接與病原體相互作用，參與免疫反應(yīng)�；罨�的血小板釋放異質(zhì)的細(xì)胞外囊泡（EVs），被認(rèn)為介導(dǎo)炎癥和凝血。血小板源性EVs在多種炎癥條件下增加，包括自身免疫性疾病，以及癌癥和病毒感染。與COVID -19陰性患者相比，住院的COVID-19患者中血小板衍生抗體的數(shù)量也有所增加。

Apogee Flow納米流式細(xì)胞儀的應(yīng)用：EVs分析中的重要工具

Apogee Flow納米流式細(xì)胞儀是一種先進(jìn)的細(xì)胞分析技術(shù)，特別適用于微小顆粒和細(xì)胞外囊泡的檢測(cè)。該儀器結(jié)合了高靈敏度的散射光和熒光檢測(cè)系統(tǒng)，以及精確的流體控制系統(tǒng)，能夠提供高分辨率的顆粒分析和細(xì)胞分型能力。

儀器在EVs檢測(cè)應(yīng)用：Apogee Flow納米流式細(xì)胞儀在EVs檢測(cè)中具有顯著優(yōu)勢(shì)。它能夠準(zhǔn)確區(qū)分不同大小和類型的EVs，包括外泌體、微泡等，同時(shí)提供關(guān)于EVs表面標(biāo)記物、內(nèi)部成分和生物活性的詳細(xì)信息。這使得Apogeeflow成為研究EVs在COVID-19感染的重要工具。

檢測(cè)精度與優(yōu)勢(shì):Apogee Flow納米流式細(xì)胞儀在EVs檢測(cè)中的精度和優(yōu)勢(shì)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：首先，它能夠檢測(cè)到低至納米級(jí)的顆粒，滿足對(duì)微小EVs的檢測(cè)需求；其次，它能夠提供多參數(shù)分析，同時(shí)檢測(cè)EVs的大小、形狀、表面標(biāo)記物和內(nèi)部成分；最后，它具有高通量檢測(cè)能力，能夠快速處理大量樣本，提高研究效率。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

利用流式細(xì)胞術(shù)分析EV的過(guò)程如圖1所示。實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)包括抗體克隆、代表性散點(diǎn)圖和門控策略。將20微升血漿稀釋，然后用2-2.5µl以下抗體在室溫下黑暗孵育2小時(shí)：藻紅蛋白（PE）偶聯(lián)CD31、異硫氰酸熒光素（FITC）偶聯(lián)CD45、PE偶聯(lián)CD61和FITC偶聯(lián)CD235a，或用3.15µl FITC偶聯(lián)乳粘附素。所有樣本都在A50-Micro（Apogee Flow Systems ）上進(jìn)行測(cè)量，計(jì)數(shù)率保持在1000到4000之間(圖1)。

圖1.采用高靈敏度流式細(xì)胞儀（hsFCM）進(jìn)行分離分別表征EVs。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在Apogee Flow分析中，與低D-二聚體組和對(duì)照組相比，高D-二聚體組CD61、CD235、CD31、CD45和乳酸粘附素的lEVs/RCs陽(yáng)性均升高（圖2）。

圖2. 高靈敏度流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)殘余細(xì)胞/大細(xì)胞外囊泡（1000-4000 nm）和中等細(xì)胞外囊泡（200-1000 nm）。

結(jié)論：Apogee Flow納米流式細(xì)胞儀在COVID-19研究中具有重要作用。它能夠檢測(cè)和分析血小板微粒的數(shù)量和活性變化，從而揭示血小板在COVID-19病理過(guò)程中的作用。此外，它還能夠檢測(cè)其他細(xì)胞外囊泡和病毒顆粒，為研究COVID-19的病毒感染機(jī)制和免疫反應(yīng)提供重要信息。該儀器的高靈敏度和高分辨率使得它能夠準(zhǔn)確區(qū)分和計(jì)數(shù)不同大小的顆粒，為疾病的早期診斷和預(yù)后評(píng)估提供有力支持。

原文：Increased circulating platelet-derived extracellular vesicles in severeCOVID-19 disease

Apogee Flow納米流式細(xì)胞儀的優(yōu)勢(shì)

Apogee Flow納米流式細(xì)胞儀作為流式細(xì)胞術(shù)的一種高級(jí)形式，具有更高的靈敏度和分辨率，能夠檢測(cè)更小的顆粒和更復(fù)雜的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。它在細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、病毒學(xué)等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用，為研究細(xì)胞的功能、相互作用和疾病機(jī)制提供了重要手段。

英國(guó)Apogee超靈敏納米流式分析儀，專為外泌體微囊泡（EVs）等小顆粒分析優(yōu)化設(shè)計(jì)，在EVs樣品顆粒大小分析，絕對(duì)定量，多標(biāo)記物同時(shí)快速分析工作中廣泛應(yīng)用。截止目前，該設(shè)備已累計(jì)參與數(shù)百篇高質(zhì)量同行審議文章相關(guān)實(shí)驗(yàn)分析工作。其出色的靈敏度，穩(wěn)定性及可靠性已備受業(yè)內(nèi)廣泛認(rèn)可，并將繼續(xù)為EVs相關(guān)基礎(chǔ)研究及轉(zhuǎn)化應(yīng)用提供堅(jiān)實(shí)支持。

Apogee納米流式除了可用于納米級(jí)別的顆粒 （如：細(xì)胞外囊泡、外泌體、微生物、病毒顆粒、LNP） 等，還可以用于作常規(guī)動(dòng)物細(xì)胞檢測(cè) （如免疫細(xì)胞、哺乳類動(dòng)物細(xì)胞、等）。它是一臺(tái)全面且功能強(qiáng)大的納米流式分析儀！

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