Bst DNA聚合酶等溫擴增到分子克隆應用

Bst DNA聚合酶 Bst DNA polymerase 來源于枯草桿菌(Bacillus stearothermophilus)的DNA聚合酶，能夠耐受高溫(最高可達65°C)，保持較高的活性。Bst DNA聚合酶具有熱穩(wěn)定性高、不具外切活性、高保真和較高活性等優(yōu)點，使其非常適合用于高溫PCR及需要單鏈末端產物和高保真序列的實驗。Bst DNA聚合酶本身不具有5'→3'外切酶活性和3'→5'外切酶活性，可以產生帶單鏈過伸端的PCR產物。這有利于其用于一些需要帶單鏈末端產物的實驗，如CRISPR等。Bst DNA聚合酶在產物克隆和測序、酶促研究以及技術和產品開發(fā)等領域有重要應用。Bst DNA聚合酶可以實現(xiàn)LAMP產物的高保真和快速擴增，縮短反應時間，提高效率，且易于操作，這為LAMP技術的發(fā)展和應用提供重要支持。

 

特點：

1. 高保真

Bst DNA聚合酶具有較高的DNA復制保真度，可以準確擴增DNA序列，產生高保真的擴增產物。這使其非常適合用于對擴增產物序列要求較高的實驗。

2. 較高活性

 Bst DNA聚合酶具有較高的DNA聚合活性，可以在較短時間內完成DNA的復制和擴增，實現(xiàn)快速PCR擴增。這可縮短PCR反應時間，加快擴增進程。

3. 易操縱

Bst DNA聚合酶易于精制和純化，價格較低廉，使用也較為方便，這使其成為常用的DNA聚合酶之一。

 

Bst DNA聚合酶應用較廣泛:

1. 高溫PCR

Bst DNA聚合酶能耐高溫，可以用于高溫PCR，擴增GC含量高和復雜二級結構的模板。這在擴增一些病原體DNA和環(huán)境DNA時具有重要意義。

2. CRISPR/Cas9基因編輯

CRISPR/Cas9系統(tǒng)需要帶單鏈過伸端的gRNA和線性化質粒，Bst DNA聚合酶不具外切活性，可以用于制備這些產物。

3. 產物克隆

使用Bst DNA聚合酶可以產生帶dA突出端的PCR產物，易于使用TA克隆進行克隆，這為一些實驗提供方便。

4. 測序

Bst DNA聚合酶可以產生高質量的PCR產物，這為基因測序等實驗提供理想的模板。

5. 酶促動力學研究

Bst DNA聚合酶易于純化和定量，其酶促動力學研究具有重要理論意義。

6. 技術開發(fā)

Bst DNA聚合酶用于LAMP、RPA、SMRT測序等技術的開發(fā)，拓展科研方法和手段。

7. 生物反應器

Bst DNA聚合酶可以配合生物反應器連續(xù)產生PCR產物，這在一些生產過程中具有應用。

8. 檢測試劑盒

許多PCR檢測試劑盒選擇Bst DNA聚合酶作為DNA聚合酶，用于病原體的檢測。

 

Bst DNA聚合酶在LAMP技術的應用:

1. 高保真

Bst DNA聚合酶具有較高的DNA復制保真度，可以準確擴增DNA序列，實現(xiàn)LAMP產物的高保真擴增。這對LAMP產物的序列要求較高的應用具有重要意義。

2. 熱穩(wěn)定

Bst DNA聚合酶能夠耐受LAMP反應的高溫(通常65°C)，在此溫度下保持較高活性，可以實現(xiàn)快速的等溫擴增。這使LAMP反應時間大大縮短，加快檢測速度。

3. 不具外切活性

Bst DNA聚合酶本身不具有外切酶活性，不會降解LAMP引物和產物的單鏈過伸端。這有利于LAMP反應的進行和產物的穩(wěn)定。

4. 較高活性

Bst DNA聚合酶具有較高的DNA聚合活性，可以在LAMP反應溫度下快速完成DNA鏈的合成，實現(xiàn)快速等溫擴增。這也可縮短LAMP反應時間，提高擴增效率。

5. 易操作

Bst DNA聚合酶較易純化和使用，這使其適合用于LAMP技術的商業(yè)化和普及。