EAS在線自動細胞采樣系統(tǒng)的性能評價
PAT（process analytical technology, PAT)技術(shù)于20世紀90年代，由FDA提出并推動在藥物的開發(fā)和制備中的應(yīng)用，旨在通過監(jiān)測和控制制藥生產(chǎn)工藝增加對制藥產(chǎn)品和制藥工藝的理解，從而最終生產(chǎn)出更具均勻一致和更高質(zhì)量的產(chǎn)品。在生物制藥的上游工藝（USP）中，不可或缺的需要持續(xù)監(jiān)測細胞密度和活力，而在PAT的核心模塊中，在線自動采樣檢測對于培養(yǎng)工藝優(yōu)化和提高生產(chǎn)效率具有重要意義。
由上�？Ｕ嫔茖W(xué)有限公司研發(fā)的在線自動采樣系統(tǒng)（External automatic sampler，EAS），該系統(tǒng)通過連接外部設(shè)備該系統(tǒng)通過連接外部設(shè)備（如: 賽多利斯 Amber250）與CytScop®Pro智能細胞計數(shù)儀，可進行細胞樣本自動采樣，樣品稀釋和系統(tǒng)清洗，實現(xiàn)細胞樣本的濃度，活率，直徑等檢測，從而實現(xiàn)對細胞生長狀態(tài)的自動化監(jiān)測，如下圖所示。
圖1 EAS連接外部設(shè)備和CytScop® Pro智能細胞計數(shù)儀示意圖
EAS主體由高精度2.5mL注射泵和十通閥組成，液路部分由Peek材質(zhì)制成，適用于各類液體，整體具有免維護，耐腐蝕，高精度等特點。
EAS在線自動采樣系統(tǒng)主要用于連接外部設(shè)備與CytScop®Pro智能細胞計數(shù)儀，實現(xiàn)自動采樣，避免人工干預(yù)。與手動采樣相比，EAS具有明顯優(yōu)勢，包括：
其次，EAS在線自動采樣系統(tǒng)具有自動稀釋功能。對于高濃度的細胞樣本，在CytScop®Pro上注冊樣本時選擇稀釋系數(shù)，EAS可以實現(xiàn)樣本的自動稀釋，得到準確的細胞計數(shù)結(jié)果，如下圖3所示。通過原液樣本2倍和3倍的稀釋，對測量結(jié)果進行線性回歸分析，可以看到自動稀釋后，測量結(jié)果具有很好的比例關(guān)系。
由上�？Ｕ嫔茖W(xué)有限公司研發(fā)的在線自動采樣系統(tǒng)（External automatic sampler，EAS），該系統(tǒng)通過連接外部設(shè)備該系統(tǒng)通過連接外部設(shè)備（如: 賽多利斯 Amber250）與CytScop®Pro智能細胞計數(shù)儀，可進行細胞樣本自動采樣，樣品稀釋和系統(tǒng)清洗，實現(xiàn)細胞樣本的濃度，活率，直徑等檢測，從而實現(xiàn)對細胞生長狀態(tài)的自動化監(jiān)測，如下圖所示。
圖1 EAS連接外部設(shè)備和CytScop® Pro智能細胞計數(shù)儀示意圖
EAS主體由高精度2.5mL注射泵和十通閥組成，液路部分由Peek材質(zhì)制成，適用于各類液體，整體具有免維護，耐腐蝕，高精度等特點。
EAS在線自動采樣系統(tǒng)主要用于連接外部設(shè)備與CytScop®Pro智能細胞計數(shù)儀，實現(xiàn)自動采樣，避免人工干預(yù)。與手動采樣相比，EAS具有明顯優(yōu)勢，包括：
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降低樣品源污染風險
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提高過程代表性數(shù)據(jù)點的頻率和采集
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縮短實驗和分析操作間的周轉(zhuǎn)時間
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減少做出關(guān)鍵過程決策所需的實驗數(shù)量
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解放人力資源，提高培養(yǎng)效率
實驗?zāi)康募胺椒?/strong>
為了檢測EAS的技術(shù)性能，我們通過一系列的對比實驗，來驗證EAS在線自動采樣系統(tǒng)的工藝性能。實驗結(jié)果分析
首先，分別通過手動采樣和EAS采樣在CytScop®Pro智能細胞計數(shù)儀上進行細胞計數(shù)，測量結(jié)果如下表1所示：表1 手動采樣和EAS采樣對CytScop® Pro細胞計數(shù)TCD的影響
其次，EAS在線自動采樣系統(tǒng)具有自動稀釋功能。對于高濃度的細胞樣本，在CytScop®Pro上注冊樣本時選擇稀釋系數(shù)，EAS可以實現(xiàn)樣本的自動稀釋，得到準確的細胞計數(shù)結(jié)果，如下圖3所示。通過原液樣本2倍和3倍的稀釋，對測量結(jié)果進行線性回歸分析，可以看到自動稀釋后，測量結(jié)果具有很好的比例關(guān)系。
圖3 EAS采樣自動稀釋線性
對三組樣本分別通過手動稀釋和自動稀釋2倍和3倍后，對檢測結(jié)果進行顯著性分析，如表2所示。發(fā)現(xiàn) P>0.05，說明手動稀釋與自動稀釋檢測結(jié)果沒有顯著性差異。進一步說明EAS的自動稀釋采樣測量結(jié)果具有很好的準確性，與手動稀釋采樣的測量具有很好的一致性。表2 不同采樣方式下樣本稀釋測量結(jié)果顯著性分析
結(jié)論
通過實驗發(fā)現(xiàn)，EAS在線自動采樣與人工采樣結(jié)果一致且穩(wěn)定，相對誤差在5%以內(nèi)，兩種采樣方式測量結(jié)果沒有顯著性差異。EAS采樣自動稀釋的線性回歸分析結(jié)果顯示，R2>0.999，說明EAS采樣自動稀釋測量結(jié)果具有非常好的準確性；自動稀釋在與手動稀釋樣本相比，測量結(jié)果沒有顯著性差異，結(jié)果一致性高。
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