三維離心冷凍研磨儀保障凍干植物RNA完整性的實戰(zhàn)指南
一般研磨樹葉樹枝通常是用來提取DNA、RNA或是蛋白質(zhì)，葉綠素等色素。葉綠素的提取用于研究植物的光合作用效率或健康狀態(tài)。也有化學(xué)成分檢測，例如生物堿，有機酸，揮發(fā)性油等。在充分了解客戶的實驗具體需求后，綜合考量實驗的精確性、高效性等因素，本次實驗決定選用三維離心冷凍研磨儀來完成相關(guān)操作。
實驗?zāi)康模?/strong>對樹葉樹枝進行研磨提取植物RNA用于后續(xù)轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒灐?br /> 工作原理：樣品通三維高速振蕩研磨樣品。
實驗設(shè)備：凈信三維離心冷凍研磨儀主機，研磨管、適配器。
樣品研磨實驗步驟：
1.樹葉剪成1-2mm²的小塊，放入研磨管中。加入適量TRIzol試劑
2.提前15分鐘打開設(shè)，啟動儀器和制冷開關(guān)。確保樣品在低溫中進行。
3.設(shè)置參數(shù)18m/S，時間60S，間隔時間20S，研磨2次
4.研磨完成取出研磨管，室溫靜置3分鐘。
RNA提取操作：
1.每TRIzol試劑加入0.2 mL氯仿,迅速蓋緊管蓋，用手劇烈振蕩。室溫靜置2-3分鐘，使混合物分層。
2.將研磨管放入離心機，設(shè)置離心參數(shù)4,000 × g，離心15分鐘（4°C條件下）。
3.離心后，混合物分為三層：上層：無色水相（含RNA）。中間層：白色蛋白相。下層：紅色有機相（含DNA和蛋白質(zhì)）
RNA沉淀：
1、小心吸取上層水相，轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中。
2、加入等體積異丙醇，輕輕顛倒混勻。室溫靜置10分鐘，使RNA沉淀。
3、4°C條件下，12,000 × g離心10分鐘，棄上清。
實驗結(jié)果：
實驗?zāi)康模?/strong>對樹葉樹枝進行研磨提取植物RNA用于后續(xù)轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒灐?br /> 工作原理：樣品通三維高速振蕩研磨樣品。
實驗設(shè)備：凈信三維離心冷凍研磨儀主機，研磨管、適配器。
冷凍研磨儀
實驗過程：樣品研磨實驗步驟：
1.樹葉剪成1-2mm²的小塊，放入研磨管中。加入適量TRIzol試劑
2.提前15分鐘打開設(shè)，啟動儀器和制冷開關(guān)。確保樣品在低溫中進行。
3.設(shè)置參數(shù)18m/S，時間60S，間隔時間20S，研磨2次
4.研磨完成取出研磨管，室溫靜置3分鐘。
RNA提取操作：
1.每TRIzol試劑加入0.2 mL氯仿,迅速蓋緊管蓋，用手劇烈振蕩。室溫靜置2-3分鐘，使混合物分層。
2.將研磨管放入離心機，設(shè)置離心參數(shù)4,000 × g，離心15分鐘（4°C條件下）。
3.離心后，混合物分為三層：上層：無色水相（含RNA）。中間層：白色蛋白相。下層：紅色有機相（含DNA和蛋白質(zhì)）
RNA沉淀：
1、小心吸取上層水相，轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中。
2、加入等體積異丙醇，輕輕顛倒混勻。室溫靜置10分鐘，使RNA沉淀。
3、4°C條件下，12,000 × g離心10分鐘，棄上清。
實驗結(jié)果：
樹枝樹葉研磨前后效果對比圖
本次實驗采用三維離心冷凍研磨儀處理凍干后的樹枝樹葉效果非常好，可以批量、高效，均一處理樣品，樣品處理好可以直接進入下一步驟，方便快捷。
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