熒光計的工作原理

熒光計的作用原理基于熒光染料與特異靶分子結(jié)合的定量分析技術(shù)，其核心優(yōu)勢在于高特異性和靈敏度。 一、核心工作原理

1. ​熒光染料選擇性結(jié)合
   達遠辰光熒光計使用熒光染料​（如dsDNA HS染料、RNA IQ染料），這些染料僅與目標分子（如DNA、RNA、蛋白質(zhì)）特異性結(jié)合，而不會與雜質(zhì)（如游離核苷酸、鹽離子）反應。例如，檢測雙鏈DNA時，染料僅與dsDNA結(jié)合，單鏈DNA或RNA不會產(chǎn)生熒光信號。
2. ​熒光信號檢測與定量
   激發(fā)光源（如LED）發(fā)出特定波長光（如502 nm激發(fā)dsDNA染料），激發(fā)結(jié)合了染料的靶分子發(fā)出熒光（如532 nm發(fā)射光）。檢測器通過濾光片分離熒光信號，避免瑞利散射光干擾，最終將信號轉(zhuǎn)換為電信號并輸出定量結(jié)果。
3. ​低濃度靈敏度
   達遠辰光的熒光計的檢測下限可達0.01 ng/μL DNA或0.02 ng/μL蛋白質(zhì)，遠低于傳統(tǒng)紫外吸光法（如Nanodrop的最低檢測限為2 ng/μL DNA）。例如，使用賽默飛Qubit dsDNA HS試劑盒可檢測0.2–100 ng/μL范圍的DNA。

二、與傳統(tǒng)紫外法的對比

​特性	​Qubit熒光計	​紫外吸光法（如Nanodrop）​
​選擇性	僅檢測靶分子，排除污染物干擾	測量所有分子在260 nm處的吸光度
​靈敏度	可檢測微量樣品（1 μL起）	需至少1–2 μL樣品，靈敏度較低
​準確性	誤差范圍更�。–V值<5%）	受污染物影響，結(jié)果偏高
​適用場景	低濃度/珍貴樣品（如NGS文庫、降解RNA）	快速篩查污染物或高濃度樣品

三、關(guān)鍵應用場景

1. ​核酸定量與純度評估
   • 區(qū)分dsDNA與ssDNA/RNA（如搭配賽默飛Qubit dsDNA HS試劑盒）。
   • 評估RNA完整性（如搭配賽默飛Qubit RNA IQ試劑盒，通過雙染料檢測完整RNA與降解RNA）。
2. ​蛋白質(zhì)定量
   • 兼容含去污劑的樣品（如搭配賽默飛Qubit Protein Assay試劑盒可耐受微量SDS）。
   • 測量范圍覆蓋12.5–20,000 μg/mL。
3. ​下游實驗支持
   • qPCR、NGS文庫構(gòu)建前精確配樣。
   • 藥物研發(fā)中評估小分子化合物濃度。

四、典型誤差來源與注意事項

• ​溫度影響：檢測管在儀器內(nèi)長時間停留可能導致溫度升高，需取出靜置后復測。
• ​試劑兼容性：不同染料對應特定靶分子，需嚴格按試劑盒說明操作。

​數(shù)據(jù)時效性：預混樣品需在3小時內(nèi)完成檢測，避免熒光信號衰減