CLDN18.2及Claudin家族靶向療法在腫瘤治療中的應用進展

來源：醫(yī)藥速覽

今年3月份，安斯泰來（Astellas Pharma）宣布，日本厚生勞動省（MHLW）批準其靶向Claudin18.2（CLDN18.2）抗體Vyloy（zolbetuximab）用于治療CLDN18.2陽性、不可切除、晚期或復發(fā)性胃癌患者,這也是首個獲得全球監(jiān)管機構批準的CLDN18.2靶向療法。當然，除了CLDN18.2, Claudin家族還有多個靶點可以用于腫瘤相關藥物的開發(fā)，如CLDN1，CLDN4和CLDN6等，本篇文章我們詳細盤點一下Claudin家族在腫瘤治療中的進展。

關于Claudin家族
人類claudin (CLDN)基因家族由CLDN1-12、14-20、22-25和34基因組成，可以編碼26種蛋白，其中CLDN10基因編碼claudin10a和claudin10b亞型，CLDN18基因編碼claudin18.1和claudin18.2亞型，主要在肺和胃啟動子的控制下表達。在功能上，細胞間緊密連接處的claudin亞型具有四個跨膜域。其中 N 端和 C 端在細胞內延伸到細胞質，以及兩個稱為 ECL1 和 ECL2 的細胞外環(huán)。第一個胞外折疊環(huán)穩(wěn)定了細胞間隙界面，而C末端細胞質區(qū)域與zonula occludens 1支架蛋白相互作用，以組裝其他緊密連接蛋白。形成同型和異型以及跨/順式的claudin蛋白復合物調節(jié)了內皮、表皮、胃腸、腎臟等界面的細胞間隙屏障或通透性功能，以維持器官和/或全身的穩(wěn)態(tài)。緊密連接的功能通過從高爾基體到質膜的前向運輸，內吞作用到早期內質網，以及對循環(huán)內質網的分選，進行動態(tài)調節(jié)，以便運輸回細胞表面或晚期內質網進行溶酶體降解。

Claudin家族與疾病
人類CLDN基因的生殖細胞突變已在非癌癥疾病患者中報道（下表）。CLDN1突變與魚鱗病、白細胞空泡、脫發(fā)和硬化性膽管炎綜合征相關。CLDN2突變與梗阻性無精子癥、高鈣尿癥和腎結石綜合征相關。CLDN10突變與低汗癥、電解質失衡、淚腺功能障礙、魚鱗病和干燥綜合征相關。CLDN9和CLDN14突變與非綜合征性耳聾相關。CLDN16和CLDN19突變與家族性高鎂血癥相關。CLDN11突變與低髓鞘化白質營養(yǎng)不良相關。Somatic CLDN18::Rho GTPase-激活蛋白（ARHGAP）6、CLDN18::ARHGAP10、CLDN18::ARHGAP26和CLDN18::ARHGAP42融合基因在3-15%的胃癌病例中被檢測到。此外，已報道CLDN1在頭頸鱗狀細胞癌（HNScc）和肝細胞癌（Hcc）中的上調，CLDN4和CLDN6在卵巢和其他類型癌癥中的上調，以及CLDN18.2在胃或胃食管結合部腺癌（GEA）和胰腺導管腺癌（PdAc）中的上調。

Claudin-1
Claudin-1作為CLDN基因家族編碼的一員，它在所有上皮細胞和內皮細胞中發(fā)揮作用，并作為緊密連接的關鍵結構組成部分。Claudin-1主要參與形成細胞間的屏障，調節(jié)細胞旁通透性，以及維持上皮細胞和內皮細胞層的細胞間黏附。在病理學上，Claudin-1與多種疾病的發(fā)生有關。例如，CLDN1基因的突變可導致皮膚進行性脫屑和膽管阻塞，這種情況被稱為新生兒硬化性膽管炎伴魚鱗病。此外，Claudin-1的異常表達也與癌癥的發(fā)生發(fā)展相關：CLDN1在HNSCC、乳腺癌、結直腸癌、胃癌、卵巢癌、胰腺癌和甲狀腺癌等，并且CLDN1高表達Hcc患者的預后比CLDN1低表達Hcc患者的預后差。

在相關藥物的開發(fā)方面，目前進展最快是Alentis Therapeutics的ALE.C04, ALE.C04是靶向Claudin-1的單抗， 其會選擇性地與暴露了Claudin-1的腫瘤細胞相結合，通過其效應功能 (ADCC) 殺傷腫瘤細胞，同時破壞腫瘤周圍的膠原屏障，恢復免疫細胞運輸，使免疫系統(tǒng)可以有效攻擊和殺死腫瘤細胞。目前，ALE.C04已被FDA列入快速通道計劃，用于治療Claudin-1陽性頭頸部鱗狀細胞癌（HNSC），正在進行1/2期臨床試驗。

當然除了單抗，Alentis Therapeutics還開發(fā)了靶向CLDN-1的ADC和TCE型雙特異抗體，其中，ALE.P02和ALE.P03是針對CLDN1陽性腫瘤的ADC藥物，兩者有不同的Payload,ALE.P02的Payload為Tubulin，而ALE.P03的Payload為TOP 1抑制劑。

在臨床前的PDX模型中，ALE.P02和ALE.P03都展現了良好的療效，目前ALE.P02針對CLDN1陽性鱗狀實體瘤的首次人體臨床試驗正在計劃中，預計將于2025年第一季度開始，對于ALE.P03，目前正在進行GLP毒理學研究，預計將于2025年啟動首次人體臨床試驗。

CLDN4
CLDN4作為緊密連接蛋白家族成員之一，在多種上皮細胞的緊密連接中起著關鍵作用，調節(jié)細胞旁路的離子和溶質的運輸。其在多種實體瘤中上調，包括三陰性乳腺癌（TNBC）、結直腸癌和胃癌（腸型）、非小細胞肺癌（NSCLC）、卵巢癌（漿液亞型）、胰腺癌和前列腺癌，以及尿路上皮癌。

在腫瘤治療方面，靶向CLDN4進展最快的為雙特異性抗體ASP1002，該雙特異抗體是由Astellas Pharma開發(fā)的靶向CLDN4和4-1BB，該雙特異抗體是對稱型雙抗，靶向4-1BB的抗體以scFv的形式連接CLDN4的末端，在體外的研究中，其通過共刺激T細胞信號激活和隨后的T細胞增殖和細胞因子產生，在CLDN4上調的癌癥中誘導抗腫瘤活性；在小鼠荷瘤實驗中，ASP1002初步展現了抗腫瘤活性。目前，ASP1002正在進行I期臨床試驗，用于治療CLDN4陽性實體瘤，如結直腸癌、卵巢癌和前列腺癌、NSCLC、TNBC和尿路上皮癌等。

CLDN6
CLDN6不僅維持組織的完整性，還具有信號傳導特性，有助于細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲等多種細胞事件。CLDN6作為緊密連接分子，在上皮細胞或內皮細胞間粘附中發(fā)揮重要的作用。在表達方面，CLDN6在胎兒組織中表達，包括胃、胰腺、肺和腎，CLDN6是胚胎干細胞中表達的最早蛋白之一，誘導上皮細胞連接的形成和極性，并參與干細胞向上皮細胞的分化。但是在成年人正常組織中幾乎檢測不到，但是越來越多的證據表明CLDN6在多種癌癥組織中特異性高表達，包括非典型畸胎樣/橫紋肌樣腫瘤、EC、胃癌、肝癌、非小細胞肺癌、卵巢癌等，其異常表達多與癌癥患者預后不良相關，因此其是比較理想的靶點。

在相關藥物開發(fā)方面，靶向CLDN6目前已經有多種形式的藥物進入臨床，包括單抗，ADC，雙抗，細胞療法等，除了下表的項目，第一三公的DS-9606，天境的TJ-C64B等項目也在穩(wěn)步推進中。

在單抗方面，ASP1650已經完成臨床研究，ASP1650由Astellas Pharma開發(fā)，是進展最快的靶向CLDN6的單克隆抗體，該抗體主要是通過ADCC，CDC等相關機制對腫瘤細胞進行殺傷，但在2022年宣布未顯示在GCT中具有臨床意義的II期結果而停止開發(fā)。

在ADC藥物開發(fā)方面，目前進展最快的是TORL BioTherapeutics公司的TORL-1-23，其是一款由抗CLDN6單抗與微管蛋白抑制劑MMAE通過可切割連接子偶聯生成的ADC。它具有高度選擇性，在體外實驗中，TORL-1-23顯示出對過度表達CLDN6的細胞系的強力和特異性結合，而不結合到過度表達其他claudin蛋白的細胞系，如CLDN3，CLDN4和CLDN9。

在去年的ASCO會議上，TORL BioTherapeutics公布了初步的臨床數據，42位患者入組并參與治療，其中多數是卵巢癌。

通過靜脈注射0.2至2.4 mg/kg的TORL-1-23，在21天的療程中，沒有發(fā)現劑量限制的毒性，耐受性良好。在接受所有劑量水平TORL-1-23治療的患者中，有7/25（28%）的患者觀察到確認的緩解。在所有劑量水平的鉑耐藥性卵巢癌患者中，有6/19（32%）的患者觀察到確認的緩解，在2.4 mg/kg劑量水平下，緩解率為3/4（75%）。

而在今年的ESMO會議上，TORL BioTherapeutics更新了TORL-1-23的臨床數據，在2.4mg/kg和3.0 mg/kg高劑量組中，45%的患者（9/20）獲得了深度持久的患者，這些患者在接受治療前已經接受過鉑類化療并且產生耐藥性。所以從目前來看，療效還不錯，期待后續(xù)的臨床結果。

同樣，在今年的ESMO會議上，ADC領域的帶頭大哥第一三共也公布其CLDN6-ADC藥物DS-9606的臨床數據，與以往的ADC不同，DS-9606的Payload采用了PDB，相對于Dxd，PDB具有更強的毒性。這也是為什么在劑量爬坡的過程中，第一三共給的劑量相對較低的原因。

劑量爬坡共有53 例既往接受過多線治療的患者入組，其中包括 19 例卵巢癌患者、11 例 GCT 患者、7 例胃癌/食管癌患者、7 例 NSCLC 患者、5 例胰腺癌患者、2例乳腺癌患者和 2 例子宮內膜癌患者�；颊呒韧�接受治療的中位治療線數為 4 線 (范圍：1～9)。

在 0.016 mg/kg 至 0.225 mg/kg 劑量遞增范圍內，對 DS-9606 的安全性和耐受性評估中，既未觀察到劑量限制性毒性，也未出現因治療相關不良事件而停藥的情況。在發(fā)生比例≥7.5%的治療中出現的不良事件 (TEAE) 中，最常見的任何級別 TEAE 包括惡心 (18.9%)、乏力 (18.9%)、貧血 (17.0%)、腹痛 (15.1%)、便秘 (13.2%)、嘔吐(13.2%)、腹瀉 (11.3%)、發(fā)熱 (9.4%)、體重下降 (9.4%)、食欲減退 (9.4%)、關節(jié)痛(9.4%)、咳嗽(9.4%)、鼻竇炎 (7.5%)、呼吸困難 (7.5%) 和 胸腔積液 (7.5%)。有 30.2%的患者 (n = 16) 發(fā)生了 3 級或以上TEAE，包括貧血 (3.8%)、腹痛 (3.8%)、胸腔積液(3.8%)、便秘 (1.9%)、嘔吐(1.9%) 和腹瀉 (1.9%)。皮膚相關不良反應(17%) 也是常見的 TEAE，大多數為 1 級事件，除了 1 例 2 級事件（皮膚色素沉著）和1 例 3 級事件（皮疹），上述兩例事件發(fā)生后給藥劑量相應減少。

在≥0.072 mg/kg 劑量組（0.190 mg/kg 劑量因數據尚不成熟未被計入）中觀察到初步有效性結果，其中4 例患者達到確認的客觀緩解，包括 2 例 GCT 患者、1 例胃癌/食道癌患者和 1 例 NSCLC 患者。在 7 例可評價的 GCT 患者中，2 例達到確認的客觀緩解的患者接受治療的時間超過 6 個月，5 例患者的甲胎蛋白和人絨毛膜促性腺激素腫瘤標志物數值下降≥90%。截至 2024 年 06 月 14 日數據截止時，53 例患者中有21 例仍在接受 DS-9606 治療。

在雙抗開發(fā)方面，Amgen的AMG794是開發(fā)較早的，其是一種BiTE®分子，可結合人和食蟹猴CLDN6和CD3。在體外，AMG794靶向橋接T細胞殺死表達CLDN6的癌細胞，EC50為2.6±1.1 pM至127.4±53.4 pM。今年7月8日，根據http://clinicaltrials.gov網站顯示，安進已經終止（TERMINATED）CLDN6/CD3雙抗AMG 794治療Claudin 6 陽性非小細胞肺癌、卵巢癌和其他惡性實體瘤的I期臨床試驗（NCT05317078），原因是“安進已作出終止 AMG794 開發(fā)的商業(yè)決定，AMG794 的安全性保持不變。目前相關臨床數據沒有披露，不過大概率還是藥效不佳。

在Claudin 6雙抗領域，另外一個比較重要的雙抗是BioNTech開發(fā)的TCE雙抗BNT142，和傳統(tǒng)的雙抗不同，該雙抗是利用BioNTech在mRNA領域的經驗，將編碼雙抗的mRNA通過脂質體包裝，在體內利用機體的細胞進行雙抗的表達并發(fā)揮作用，在結構上其是CD3的Fab串聯CLND6的scFv，屬于2+1的結構。目前該藥物還在臨床中，沒有相關數據披露。

另外一個進入臨床的雙抗是Xencor的Xmab541,該雙特異抗體同樣是2+1型結構，其中兩個Fab靶向結合CLDN6，同時其含有Fc，相對于BioNTech的雙抗具有更長的半衰期。

值得注意的是，羅氏旗下的中外制藥也開發(fā)了靶向CLDN6的三抗SAIL66,其結構如下圖所示，為典型的1+1型非對稱雙抗，不同的是，其CD3 Fab端具有結合4-1BB的能力，因此該雙抗的構建是基于其新型的雙抗平臺《論創(chuàng)新，我只服中外制藥！》，這里不再贅述，感興趣的朋友可以通過鏈接進行詳細了解。

而在Car-T方向，BioNTech的BNT211是目前進展最快的，其由兩種創(chuàng)新方法組成，一種是針對癌胚抗原CLDN6的自體CAR-T細胞治療，另一種是獨特的CAR-T細胞擴增mRNA疫苗，它的設計原理是利用mRNA編碼CAR-T細胞靶向的抗原，CARVac能夠選擇性地讓淋巴結中的抗原呈遞細胞表達CAR-T細胞靶向的抗原，從而在患者體內激發(fā)CAR-T細胞的擴增。

在今年的ESMO會議上，BioNTech公布了BNT211的最新臨床研究結果PartB, PartA的臨床結果已經在線發(fā)表《CLDN6-specific CAR-T cells plus amplifying RNA vaccine in relapsed or refractory solid tumors: the phase 1 BNT211-01 trial》，在21名可評估的癌癥患者中，客觀緩解率（ORR）為33%（7/21），疾病控制率（DCR）為67%（14/21），其中1人完全緩解，6人部分緩解，7人病情穩(wěn)定。其中，接受高劑量治療（1 × 108個CAR-T細胞）的生殖細胞腫瘤患者的客觀緩解率（ORR）最高，達到了57%（4/7）。

PartB的臨床分為兩部分，CAR-T單藥治療組和CAR-T+CARVac組，不同的組進行劑量爬坡。CAR-T單藥治療組劑量從1*106到5*108，CAR-T+CARVac組主要是1*107到1*108劑量和CARVac聯用�；颊呷虢M主要是通過CLDN6的篩選，基本上都是CLDN6 2+/3+陽性患者，并且在接受CAR-T治療前平均接受過4線治療。

療效方面，在接受治療并進行評估的64位患者中，總體的ORR為32.8%，CR為4.1%，DCR為67.2%；而在41位接受過DL2及以上劑量治療的患者中，OOR為51.5%，DCR為84.8% （下圖深藍色部分）。

在睪丸癌中，25位接受治療并進行評估的患者中，總體ORR為24%，DCR為56%，同樣在高劑量組，ORR有一定的提升，為41.&%,DCR為75%。

在卵巢癌中，總體客觀緩解率要優(yōu)于睪丸癌，ORR為33.3%，DCR為75，在高劑量組中，ORR提升到58.3%，DRC為83.3%。

安全性方面，在所有劑量組中，CRS多數為1-2級，3級及以上的概率為2.6%，總體來說相對較低，基本上和雙抗一個水平；ICANS方面，總體發(fā)生率較低，且都是1-2級。除此之外，相對比較嚴重的是免疫效應細胞相關HLH 樣綜合征（HLH/IEC-HS），總體發(fā)生率為16.7%且多數發(fā)生在高劑量組。其它常見的副作用為貧血，長期血細胞減少，白血球減少癥，血小板減少癥等。

CLDN18.2
CLDN18.2作為成熟的靶點，已經有單抗獲批上市，而且也是賽道最擁擠的靶點，目前有多款ADC，雙抗，CAR-T療法在臨床中。其中臨床中進展最快的是ADC方向，包括信達，樂普/康諾亞，恒瑞，德琪醫(yī)藥等都有布局，在今年的ASCO會議上各大藥企也紛紛展示了相關領域的進展，下圖是相關管線的進展，因為管線太多，詳細數據這里不再展示。

總結
CLDN家族中，CLDN18.2比較成熟并且已經有藥物獲批上市，因此目前競爭相當激烈，包括ADC，雙抗，CAR-T，其中信達一家三種療法都有布局，可見該靶點的吸引力有多大。當然除了CLDN18.2，CLDN家族還有一些其它靶點相對來說競爭沒有那么激烈，包括CLDN6，目前已經有ADC，和CAR-T已經披露了初步數據，并且展現了良好的療效，證明了該靶點也有很大的成藥性潛力，另外，CLDN1和CLDN4也有相關ADC或者雙抗布局，但是目前還沒有臨床數據披露，也是一個值得探索的方向。