文獻(xiàn)解讀:多孔粘彈性水凝膠的觸發(fā)式微孔形成生物打印
瀏覽次數(shù):204 發(fā)布日期:2025-3-28
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發(fā)表期刊:Materials Horizons
影響因子:12.2
發(fā)表年份:2020
作者單位:加拿大麥吉爾大學(xué)機(jī)械工程系
DOI:10.1039/d0mh00813c.
研究背景
再生醫(yī)學(xué)和組織工程的關(guān)鍵在于構(gòu)建模擬生物組織力學(xué)特性和孔隙結(jié)構(gòu)的支架。然而,現(xiàn)有技術(shù)難以同時(shí)實(shí)現(xiàn)孔隙大小和支架粘彈性的精確調(diào)控。
模擬宿主組織結(jié)構(gòu)和力學(xué)的細(xì)胞負(fù)載支架對(duì)于廣泛的生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用非常重要,但生物打印仍具有挑戰(zhàn)性。為了應(yīng)對(duì)這些挑戰(zhàn),研究者報(bào)告了一種稱為觸發(fā)式微孔形成生物打印的新方法。 這種方法可以產(chǎn)生具有確定結(jié)構(gòu)和互連孔隙的細(xì)胞負(fù)載支架,孔隙大小不一,涵蓋多種細(xì)胞類型。生物打印支架的粘彈性可以與生物組織的粘彈性相匹配,并且不受孔隙率和硬度的影響。盡管孔隙率較高,但生物打印支架也表現(xiàn)出卓越的機(jī)械堅(jiān)固性。生物打印方法和由此產(chǎn)生的支架支持細(xì)胞擴(kuò)散、遷移和增殖。 三維生物打印系統(tǒng)在聲帶組織工程和體外癌癥模型方面的潛力得到了證實(shí)。其他可能的應(yīng)用還包括組織修復(fù)、再生醫(yī)學(xué)、芯片器官、藥物篩選、器官移植和疾病建模。
研究方案
1. 觸發(fā)微孔形成機(jī)制
- 使用殼聚糖和聚乙二醇(PEG)作為生物墨水,通過pH誘導(dǎo)微相分離形成細(xì)胞級(jí)孔隙。
- 水凝膠的粘彈性通過改變PEG濃度調(diào)節(jié),同時(shí)保持其結(jié)構(gòu)完整性。
2. 生物打印與測(cè)試
- 打印多層支架并評(píng)估其機(jī)械性能、孔隙結(jié)構(gòu)、降解特性及細(xì)胞相容性。
- 在支架中培養(yǎng)聲帶成纖維細(xì)胞(hVFFs)和癌細(xì)胞(MDA-MB-231),驗(yàn)證其組織工程和疾病建模能力。
觸發(fā)式微孔形成(TMF)生物打印。(a)將含有細(xì)胞的生物墨水(深藍(lán)色)通過 TMF 生物打印技術(shù)制成具有確定結(jié)構(gòu)(特征尺寸 P)的支架。(b) 在相分離誘導(dǎo)基質(zhì)(PSIM,淺藍(lán)色)內(nèi)形成的多孔粘彈性水凝膠(PVH),該基質(zhì)支撐擠出的生物墨水并提供相分離誘導(dǎo)劑(灰色三角形),從而在高溫下形成細(xì)胞大小的孔(孔徑 p)。(c)以聚乙二醇(PEG)為交聯(lián)劑調(diào)節(jié) PVH 的粘彈性響應(yīng)。粘彈性響應(yīng)表現(xiàn)為恒定應(yīng)變下的應(yīng)力松弛。(d)分層多孔支架的熒光圖像;比例尺為 2 毫米。(e)用羅丹明-B(紅色)標(biāo)記的生物打印支架內(nèi)部微孔的共焦圖像;比例尺為 30 微米。
研究成果
1. 支架結(jié)構(gòu)與性能
- 打印的水凝膠具有高孔隙率(>60%)和細(xì)胞大小的互聯(lián)孔隙(平均約17.8 µm)。
- 水凝膠儲(chǔ)存模量范圍為0.5–27 kPa,可覆蓋大多數(shù)軟組織的力學(xué)需求。
2. 細(xì)胞相容性與功能
- 水凝膠支持細(xì)胞擴(kuò)展、遷移和增殖,細(xì)胞存活率始終超過90%。
- 高孔隙率顯著提高了厚支架中的營養(yǎng)交換效率,避免了NEH(傳統(tǒng)彈性水凝膠)中的中心壞死現(xiàn)象。
3. 應(yīng)用場(chǎng)景
- 聲帶工程: 打印的雙層支架能模擬聲帶的復(fù)雜層結(jié)構(gòu),促進(jìn)細(xì)胞粘附和分布。
- 癌癥模型: PVH支架中癌細(xì)胞的增殖和聚集行為隨著粘彈性調(diào)節(jié)而變化,展現(xiàn)其對(duì)腫瘤侵襲性的影響。
未來展望
1. 創(chuàng)新貢獻(xiàn)
- TMF生物打印技術(shù)首次實(shí)現(xiàn)粘彈性、孔隙度和剛度的獨(dú)立調(diào)控,顯著擴(kuò)展了生物打印材料的設(shè)計(jì)窗口。
2. 潛在應(yīng)用
- 該技術(shù)可廣泛應(yīng)用于組織修復(fù)、疾病建模、藥物篩選和器官移植等領(lǐng)域。
- 未來研究可進(jìn)一步優(yōu)化此方法并探索更多類型的生物墨水。
設(shè)備應(yīng)用
在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)研究中,用橙色 DNA 選擇性染色劑(Invitrogen 公司,V35005)對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色,染色后立即將其嵌入殼聚糖水凝膠中。將含有細(xì)胞的水凝膠轉(zhuǎn)移到無細(xì)胞粘附涂層的 8 孔培養(yǎng)板中,并使用JuLI™ Stage活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)連續(xù)監(jiān)測(cè)RFP通道超過48小時(shí)。

(e) hVFFs 在 PVH 內(nèi)遷移的實(shí)時(shí)成像。兩個(gè)移動(dòng)的細(xì)胞分別用藍(lán)色和綠色箭頭標(biāo)記,一個(gè)靜止的細(xì)胞用黃色箭頭標(biāo)記,以供參考。(f)PVH 和 NEH 內(nèi)的細(xì)胞運(yùn)動(dòng)。