從菌懸液制備到抗力測定的全流程中四大生物指示劑關鍵要素介紹

生物指示劑（Biological Indicators, BIs）是評價滅菌過程有效性的核心工具，其生產與性能驗證需嚴格遵循ISO 11138標準，是確保生物指示劑的可靠性、穩(wěn)定性與可追溯性的關鍵。

本文延續(xù)上期對術語和定義的探討，完整闡述從菌懸液制備到抗力測定的全流程要求，為您揭示4大關鍵要點，助您避開生物指示劑滅菌監(jiān)測失敗的陷阱。

一、核心術語標準化定義——清晰界定是基礎
載體（carrier）：可負載試驗微生物的支持材料。
菌種保藏編號 （culture collection number）：由科學界公認的菌種保藏機構提供的試驗微生物的唯一編號。
活菌量（viable count）：實際可回收的菌落形成單位或其他合適單位的數量。
抗力儀（resistometer）：為測量滅菌過程中產生的物理和/或化學參數相關組合而設計的測量設備。
初級包裝（primary package）：包裝系統(tǒng)的一部分，用于維持產品的完整性。
注:保護染菌載體免受損壞和污染，而不阻礙滅菌因子穿透的系統(tǒng)。
次級包裝（secondary package）：為測量滅菌過程中產生的物理和/或化學參數相關組合而設計的測量設備。

二、生產規(guī)范要求——嚴控源頭保質量
通過規(guī)范菌懸液制備工藝及全程質控、嚴格執(zhí)行載體與包裝材料標準、強化染菌載體制造全流程管控，實現生物指示劑安全性和穩(wěn)定性的全面提升。

三、孢子數和抗力測定——關鍵指標定成敗
（一）抗力試驗要求
1、明確目的保性能
抗力試驗的主要目的是證明每批次生物指示劑符合性能要求。
2、判定標準依規(guī)范
試驗要證明每批次生物指示劑滿足既定性能要求。在ISO 11138標準其他部分未明確規(guī)定抗力性能時，依據ISO 14937中特定關鍵變量定義抗力性能。
3、試驗全面重整合
抗力試驗不僅要測定抗力特性，還需整合活菌計數步驟，全面準確地評估生物指示劑性能。
4、警示清晰明風險
當孢子數和/或抗力低于規(guī)定值時，產品標簽上必須有明確警示，提醒使用者注意潛在風險。

（二）試驗微生物與數量
1、微生物明確且精準
必須清晰規(guī)定試驗微生物，并準確確定其活菌數。
2、孢子數驗證有范圍
孢子數驗證通過的標準是測定結果在制造商標稱值的50%-300%范圍內，即使低于文件規(guī)定的最低孢子數要求，只要在此比例范圍內仍視為合格。

（三）抗力特性測定
1、多種方法相結合
結合使用存活曲線測定D值、陰性分數法測定D值以及驗證存活-殺滅反應特性三種方法。
2、數值規(guī)定要達標
測定結果需符合ISO 11138其他部分的規(guī)定，并在生物指示劑標簽上至少標注兩個相關數據。
3、標定D值保穩(wěn)定
制造商提供的檢測方法測得的標定D值在有效期內應保持在±20%的范圍內。存活曲線雖允許一定誤差，但需維持在可接受的線性范圍內。
4、存活曲線與抗性水平
計數法得到的存活曲線顯示活菌抗性超過5×101。陰性分數法統(tǒng)計分析表明存活試驗中的微生物抗性低于計數法所得水平。兩種方法測得的D值間展現良好相關性，且與預期線性存活曲線無顯著偏差。
5、特定滅菌方式的額外要求
ISO11138其他部分可能針對特定滅菌方式增加要求，如z值。
6、D值驗證有范圍
在規(guī)定有效期內，D值的確認測試結果在±20%范圍內即認為初始D值通過驗證，即使低于文件定義的最小D值要求。
7、存活曲線應準確
用存活菌數的log10對時間所作的半對數曲線，其線性相關系數r²應至少達到0.8。
8、試驗條件嚴控制
抗力特性的測定應在指定的試驗條件下進行，見表2。

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