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siRNA/microRNA/過表達慢病毒包裝(慢病毒載體構(gòu)建,慢病毒包裝,滴度測定)
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服務(wù)商: 百奧邁科生物技術(shù)有限公司 | 查看該公司所有服務(wù) >> |
慢病毒載體包裝服務(wù)
1 特點:
1) 直接包裝成為假病毒顆粒,對分裂和非分裂細胞均有感染作用,適合研究和體內(nèi)實驗中
難于轉(zhuǎn)染的細胞 (比如神經(jīng)元細胞、干細胞或其它原代細胞)。
2) 可以通過簡單方式,在短時間內(nèi)獲得穩(wěn)定表達特定基因的多種細胞株。
3) 可用于基因敲除、基因治療和轉(zhuǎn)基因動物研究。
4) 無需任何轉(zhuǎn)染試劑,操作簡便。
5) 可以根據(jù)客戶需要制備多種標(biāo)記。
2 原理:
慢病毒(Lentivirus)是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種。,一方面可以擴增替代瞬時表達載體使用,
另一方面,Lentivirus-siRNA 克隆經(jīng)過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后,可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)
染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞和處于非分裂狀態(tài)的細胞,并且在感染后可以整合到受感染細胞
的基因組,進行長時間的穩(wěn)定表達。
3 慢病毒包裝簡要流程:
1) 含有目的基因的慢病毒siRNA/microRNA 載體或過表達載體的構(gòu)建和質(zhì)粒純化提取。
2) 慢病毒載體,包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染病毒包裝細胞。
3) 培養(yǎng)48hrs - 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培養(yǎng)液。
4) 病毒的純化和濃縮。
5) 分裝、- 80 oC 保存。
6) 滴度測定目的基因檢定,并出具檢測報告。
4 本公司提供的最終產(chǎn)品包括:
1) 重組后的慢病毒載體質(zhì)粒以及測序圖譜。
2) 產(chǎn)品無菌檢測結(jié)果。
3) 慢病毒儲液及相應(yīng)的病毒滴度。
我們保證:1) 制備的病毒顆粒攜帶片段的正確性2) 病毒顆粒的總數(shù)和病毒滴度:如無特殊要求我
們提供1mL 滴度為1×107 - 1×108 / mL 的病毒儲液。