百恩維生物已成功構(gòu)建完整的各種蛋白表達(dá)技術(shù)平臺:包括原核蛋白表達(dá)與純化、昆蟲蛋白表達(dá)與純化、哺乳動物蛋白表達(dá)與純化。根據(jù)客戶的需求,我們提供從基因合成,質(zhì)粒構(gòu)建,基因表達(dá),蛋白純化、檢測等一站式服務(wù)。為了保證蛋白純化的質(zhì)量,百恩維生物建立了嚴(yán)格的產(chǎn)品質(zhì)控體系及一整套完善的客戶服務(wù)流程、保密制度以確保為客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品及一流的服務(wù)。
我們的蛋白質(zhì)團(tuán)隊在優(yōu)化基因密碼子、表達(dá)載體的設(shè)計和構(gòu)建、融合對象和標(biāo)簽的選取、特定蛋白純化系統(tǒng)的選擇、蛋白生產(chǎn)工藝的優(yōu)化等方面,擁有極其豐富的經(jīng)驗?梢詽M足客戶個性化的需求。
昆蟲細(xì)胞表達(dá)與純化
昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)是應(yīng)用較多的真核表達(dá)系統(tǒng),它可以在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)多種外源基因,包括真菌,植物,細(xì)菌,病毒的基因。桿狀病毒是一類以昆蟲細(xì)胞為天然宿主的雙鏈DNA病毒,具有高度的種屬特異性,不感染脊椎動物,對人、畜無害。目前研究較多的是苜蓿銀紋夜蛾核多角體 (AcNPV) ,其宿主是草地貪夜蛾。而sf9細(xì)胞,正是桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的宿主細(xì)胞之一。sf9細(xì)胞屬于半貼壁型細(xì)胞系,可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng),也可以進(jìn)行貼壁培養(yǎng),在應(yīng)用于蛋白的表達(dá)與制備純化中,有著許多的優(yōu)點(diǎn)。
1、與其他真核表達(dá)系統(tǒng)相比,外源基因表達(dá)水平高,特別是細(xì)胞內(nèi)蛋白。多數(shù)情況下,表達(dá)的重組蛋白可溶,折疊正確有翻譯后修飾(如糖基化等),有生物學(xué)活性,容易分離純化;
2、昆蟲細(xì)胞懸浮生長,容易放大培養(yǎng),有利于大規(guī)模表達(dá)重組蛋白;
3、易于表達(dá)異源多聚體蛋白,可通過多種重組病毒同時感染昆蟲細(xì)胞細(xì)胞或用含有多個表達(dá)框的一種病毒感染昆蟲細(xì)胞來實(shí)現(xiàn);
4、安全性。昆蟲桿狀病毒不感染脊椎動物。
百恩維生物提供桿狀病毒表達(dá)載體構(gòu)建、表達(dá)檢測以及從大容量細(xì)胞培養(yǎng)表達(dá)和蛋白純化等一站式蛋白表達(dá)技術(shù)服務(wù)。
1、 克隆目標(biāo)蛋白編碼序列到昆蟲桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體上;
2、 制備重組質(zhì)粒;
3、 轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞,制備病毒;
4、 病毒滴度測定
5、 重組蛋白表達(dá)驗證和條件優(yōu)化;
6、 小規(guī)模蛋白表達(dá)和純化(500 ml培養(yǎng)物);
7、 大規(guī)模蛋白表達(dá)和純化(可選,適合于生物醫(yī)藥研究企業(yè))。
相關(guān)技術(shù)服務(wù):
昆蟲桿狀病毒制備技術(shù)服務(wù):
蛋白表達(dá)優(yōu)化技術(shù)服務(wù):
1、由客戶提供5-10ml重組桿狀病毒;
2、感染昆蟲細(xì)胞獲得高滴度病毒;
3、表達(dá)條件優(yōu)化。
優(yōu)化因素包括:
不同的昆蟲細(xì)胞系
不同的表達(dá)時間;
不同的感染復(fù)數(shù)(MOI)。
病毒滴度測定服務(wù)
空斑實(shí)驗測定滴度。